人17羟孕酮(17-OHP)ELISA试剂盒

检测原理

采用竞争法：

微孔板预包被抗17-OHP抗体。

样本/标准品中的17-OHP与加入的酶标记17-OHP衍生物（HRP/ALP标记）竞争结合抗体位点。

洗板后去除未结合物质，加入底物（TMB等）显色。

颜色深浅与样本中17-OHP浓度成反比，在450 nm（参考波长630 nm）测OD值。

样本处理

| 样本类型 | 处理方法 |

| 血清/血浆 | 离心分离后直接检测，避免溶血、脂血 |

| 干血斑（DBS） | 打孔（3.2 mm直径），用缓冲液浸泡提取（参照专用步骤） |

操作步骤

准备：平衡试剂至室温（30分钟），配制标准品/质控品（按浓度梯度稀释）。

加样：

孔1-2：零标准（0 ng/mL）

孔3-7：标准品（例：2, 5, 15, 30, 50 ng/mL）

剩余孔：待测样本/质控（双复孔）

加酶结合物：每孔加入酶标记物。

孵育：37°C 温育60分钟（具体时间参照说明书）。

洗板：自动洗板机或手工洗板5次。

显色：每孔加底物，避光室温孵育15分钟。

终止：加终止液（H₂SO₄或HCl溶液），颜色由蓝变黄。

读值：30分钟内测450 nm OD值。

结果计算

计算标准品与零标准的OD值比值（B/B₀%）

$$ B/B₀% = \frac{\text{标准品/样本OD值}}{\text{零标准平均OD值}} \times 100% $$

以标准品浓度为X轴，B/B₀%为Y轴，绘制log-log曲线（四参数拟合Logistic曲线为优）。

根据样本的B/B₀%值，从曲线读取浓度（ng/mL）。

注：部分试剂盒提供在线计算软件或Excel模板。

性能参数

| 指标 | 参数 |

| 精密度 | 板内变异系数（CV）< 8%，板间CV < 12% |

| 回收率 | 85-115%（加标回收试验） |

| 特异性 | 与孕酮、雄烯二酮交叉反应 < 1%，皮质醇 < 0.01% |

| 线性稀释 | 稀释相关性 R² ≥ 0.95 |

注意事项

仅限专业人员使用，严格遵循生物安全操作规范。

不同批号试剂不可混用。

临界值样本需复查，建议双孔检测。

治疗药物（如糖皮质激素）可能干扰结果。
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