产品概述

LAT（Linker for Activation of T cells），即T细胞活化连接蛋白，是T细胞受体信号转导通路中的关键接头蛋白。该试剂盒主要用于科研领域，定量测定人血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆中LAT蛋白的含量。

核心原理：双抗体夹心法

试剂盒采用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）。

包被：酶标板微孔中已预包被抗人LAT单克隆抗体。

反应：加入样本（含LAT抗原）和HRP标记的检测抗体，形成“捕获抗体-抗原-HRP标记抗体”的夹心复合物。

显色：加入底物TMB，在HRP酶的催化下显色（蓝色），酸化后变为黄色。

检测：颜色深浅与样本中LAT的浓度呈正相关。在450nm波长下测定吸光度（OD值）。

试剂盒组成

组分名称 规格/参数 保存条件

酶标包被板 48孔 / 96孔 (可拆卸) 2-8℃保存

标准品 冻干粉或溶液 (如 400 pg/mL) 2-8℃保存

酶标试剂 (HRP标记抗体) 6ml - 10ml 2-8℃保存

样品稀释液 6ml 2-8℃保存

浓缩洗涤液 20× 或 30× 浓缩液 2-8℃保存

显色剂 A & B 各6ml 2-8℃，避光

终止液 6ml (2M H₂SO₄) 2-8℃保存

封板膜 2张 室温

样本处理与保存

血清：

使用无热原、无内毒素的试管采集血液。

室温静置10-20分钟待血液凝固。

3000转/分离心10-20分钟，小心收集上清液。

血浆：

使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

采集后混合均匀，3000转/分离心10-20分钟，收集上清。

细胞/组织：

细胞上清：离心去除细胞碎片，取上清检测。

组织匀浆：用预冷的PBS冲洗组织，称重后按1:9（组织:PBS）比例进行匀浆，离心取上清。

注意事项：

避免溶血：溶血标本会增加非特异性显色。

保存：样本若不立即检测，应分装后于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

操作步骤

平衡：试剂盒从冰箱取出，平衡至室温（18-25℃），约需15-30分钟。

配液：将浓缩洗涤液按说明书比例（如1:20或1:30）用蒸馏水稀释。

加样：

设定空白孔（不加样品及酶标试剂）、标准品孔（各浓度梯度）和样本孔。

样本孔：先加40μl样品稀释液，再加10μl待测样本（最终稀释倍数通常为5倍）。

标准品孔：加入50μl不同浓度的标准品。

温育：用封板膜封板，37℃温育30-60分钟。

洗涤：弃去孔内液体，每孔注满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

加酶：每孔加入酶标试剂50μl（空白孔除外）。

温育与洗涤：重复步骤4和5。

显色：每孔加入显色剂A、B各50μl，37℃避光显色10-15分钟。

终止：每孔加入50μl终止液，轻轻震荡混匀。

读数：在450nm波长处测定吸光度（OD值），建议在加终止液后15分钟内完成读数。

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