检测原理

采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：

预包被抗人α1-MG抗体于酶标板孔中。

加入样本或标准品，α1-MG与固相抗体结合。

加入生物素标记的抗α1-MG检测抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物。

加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin），与生物素结合。

加入TMB底物显色，颜色深浅与样本中α1-MG浓度成正比。终止液终止反应后，在450nm波长下测定吸光度（OD值）。

用途

定量检测人血清、血浆或尿液中α1微球蛋白含量，临床应用于：

肾功能评估（肾小管损伤标志物）

糖尿病肾病、高血压肾病早期诊断

药物肾毒性监测

自身免疫性疾病相关研究

检测范围

0.312–20 ng/mL

注：部分高灵敏度试剂盒可达0.1 ng/mL。

样本要求

| 样本类型 | 预处理要求 | 保存条件 |

| 血清 | 室温凝固30min，离心10min (2000×g) 取上清 | 2–8°C 保存24h，-20°C 长期冻存（避免反复冻融） |

| 血浆（EDTA/肝素） | 离心10min (2000×g) 去除颗粒物 | 同血清 |

| 尿液 | 离心后取上清，建议稀释5~10倍检测 | 2–8°C 保存48h，-20°C 冻存 |

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被酶标板 | 96孔（可拆卸） | 1块 |

| α1-MG标准品 | 冻干粉或液体（浓度梯度） | 6~7管 |

| 样品稀释液 | 15–30mL | 1瓶 |

| 生物素化检测抗体 | 1.5mL | 1支 |

| HRP-链霉亲和素 | 1.5mL | 1支 |

| TMB显色液 | 10mL | 1瓶 |

| 终止液（1M H₂SO₄） | 10mL | 1瓶 |

| 洗液（20×浓缩） | 30mL | 1瓶 |

| 封板膜 | 一次性 | 4张 |

| 说明书 | — | 1份 |

操作步骤

准备：恢复试剂至室温（约30min），配制洗液（1×）。

加样：每孔加标准品/样本100μL，37°C 孵育90min。

洗涤：甩干液体，加洗液静置30s，重复洗板5次。

加检测抗体：每孔加生物素化抗体100μL，37°C 孵育60min。

洗涤：同步骤3。

加酶结合物：每孔加HRP-链霉亲和素100μL，37°C 孵育30min。

洗涤：同步骤3。

显色：每孔加TMB底物90μL，避光室温反应15~20min。

终止：每孔加终止液50μL。

读数：450nm波长下测量OD值（630nm作参比）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值从曲线计算浓度（稀释样本需乘以稀释倍数）。

典型参考值：

尿液：<12mg/g肌酐（成人）

血清：10–30mg/L

技术性能

| 参数 | 数值 |

| 灵敏度 | ≤0.1 ng/mL |

| 精密度 | 板内CV<8%，板间CV<12% |

| 回收率 | 85–115% |

| 特异性 | 不与α2-MG、β2-MG、RBP等交叉反应 |

注意事项

试剂使用前平衡至室温，避免污染。

洗板需彻底，残留液体会影响结果。

TMB显色时间需严格控制，避免过度反应。

样本避免反复冻融，溶血/脂血可能干扰结果。

超出检测范围的样本需稀释后复测。

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