检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。预包被在微孔板上的抗人α2-AP单克隆抗体捕获样本中的α2-AP抗原，加入生物素标记的抗人α2-AP二抗形成复合物，再与链霉亲和素-HRP结合。最终通过TMB显色，在450nm波长测定吸光度（OD值），其强度与样本中α2-AP浓度呈正比。

适用范围

定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液中α2抗纤溶酶的含量。

主要试剂组分

| 组分名称 | 96孔板用量 | 状态 |

| 预包被抗人α2-AP微孔板 | 1块 | 即用型 |

| 人α2-AP标准品（冻干粉） | 2管 | 用前复溶 |

| 生物素标记抗人α2-AP抗体 | 1瓶（120μL）| 浓缩液 |

| 链霉亲和素-HRP结合物 | 1瓶（120μL）| 浓缩液 |

| TMB显色液 | 1瓶（11mL） | 即用型 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（12mL） | 即用型 |

| 洗涤缓冲液（30×浓缩液） | 1瓶（20mL） | 用前稀释 |

| 样本稀释液 | 1瓶（12mL） | 即用型 |

样本处理要求

血清/血浆采集： 使用EDTA或肝素抗凝管，离心去除杂质（避免溶血、脂血）。

短期保存： 2-8°C ≤24小时

长期保存： -20°C或-80°C（避免反复冻融）

稀释要求： 通常建议用样本稀释液1:100~1:200初步稀释（具体比例参照说明书）。

标准曲线范围

3.125 ng/mL — 200 ng/mL

标准品浓度梯度（复溶后）：

0 ng/mL、3.125 ng/mL、6.25 ng/mL、12.5 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL。

操作步骤

标准品与样本： 加样100μL至相应孔中，37°C孵育90分钟。

洗板： 弃液，洗涤液洗3次。

加生物素抗体： 每孔加100μL，37°C孵育60分钟。

洗板： 重复洗涤步骤。

加HRP结合物： 每孔100μL，37°C避光孵育30分钟。

洗板： 重复洗涤5次。

显色： 加TMB 90μL/孔，避光反应15-20分钟（显蓝色）。

终止： 加终止液50μL/孔（变黄色）。

检测： 30分钟内于酶标仪读取450nm波长下的OD值（建议使用630nm参比波长）。

结果计算

计算标准品平均OD值，绘制标准曲线（Y：OD值，X：浓度）。

根据样本OD值，代入曲线方程自动计算浓度（推荐使用分析软件）。

若样本被稀释，需乘以稀释倍数获得实际浓度。

性能参数

| 指标 | 结果 |

| 灵敏度 | ≤1.0 ng/mL |

| 板内精密度 | CV% < 10% |

| 板间精密度 | CV% < 15% |

| 回收率 | 85%-115%（参考说明书） |

| 特异性 | 不与人α1-抗胰蛋白酶等交叉反应 |

注意事项

关键提示：

批次差异： 不同批次试剂盒禁止混用。

温度一致： 所有试剂及样本必须恢复至室温（20-25°C）。

精确计时： 每步孵育时间影响结果准确性。

避免污染： 微孔板勿用手触碰底部，吸头一次性使用。

数据有效性： 标准曲线R²值应 ≥0.99，否则需重测。

健康防护： 终止液含强酸，需穿实验服并戴手套操作。

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