检测原理

本试剂盒采用基于微孔板的双抗体夹心酶联免疫吸附法原理定量检测人TLR2蛋白。具体步骤为：

预包被： 微孔板预包被有特异性捕获抗体（抗人TLR2单克隆抗体）。

加样： 将标准品、质控品和待测样本加入相应的微孔中。

结合： 样本中的TLR2蛋白与包被在孔底的捕获抗体特异性结合。

孵育与洗涤： 经过温育孵育后，洗去未结合的成分。

加检测抗体： 加入生物素标记的特异性检测抗体（抗人TLR2单克隆或多克隆抗体）。

结合与洗涤： 检测抗体与之前形成的复合物结合，再次孵育后洗去未结合的检测抗体。

加酶标物： 加入链霉亲和素（Streptavidin）-辣根过氧化物酶（HRP）偶联物。

结合与洗涤： HRP偶联物与生物素标记的检测抗体结合，孵育后彻底洗去未结合的偶联物。

显色： 加入底物液（TMB）。HRP催化TMB发生显色反应。

终止反应： 加入终止液（稀硫酸），反应从蓝色变为黄色。

读数： 在酶标仪上读取450 nm波长处的吸光度（OD值）。

定量计算： 根据标准品的浓度与其对应的OD值绘制标准曲线，通过待测样本的OD值在标准曲线上推算出其对应的TLR2浓度。

试剂盒组分

预包被抗人TLR2微孔板： 1 x 96孔（或可根据说明书拆分使用）。

人TLR2标准品： 1瓶（冻干粉或溶液），通常需复溶并稀释成系列浓度梯度（如 0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL）。

检测抗体（生物素标记抗人TLR2）： 1瓶（溶液）。

链霉亲和素-HRP偶联物： 1瓶（溶液）。

样品稀释液： 1瓶（用于稀释标准品、样本、质控品）。

洗涤缓冲液（20x 或 30x）： 1瓶（浓缩液，使用前需用去离子水稀释）。

底物液（TMB）： 1瓶（避光保存）。

终止液： 1瓶（通常为1M或2M硫酸溶液）。

封板膜： 若干张（用于覆盖反应板）。

产品说明书： 1份（包含详细的实验流程和安全信息）。

需自备但未提供的材料与设备

去离子水

精密移液器及相应吸头

振荡器或微量振荡仪

多道移液器

酶标仪（可读取450nm波长，**具有570nm或620nm双波长校正功能）

吸水纸

洗板机（手动洗板需洗瓶或广口量筒）

计时器

-20°C/-80°C冰箱

2-8°C冰箱

一次性试管用于稀释

离心机（用于处理某些样本）

漩涡混合器

安全防护设备（实验服、手套、护目镜）

样本收集与处理

血清： 使用血清分离管收集全血，室温凝结30分钟，1000 x g离心15分钟，小心收集上清（血清）。避免溶血。新鲜血清检测**；如需保存，分装后-20°C或-80°C冷冻，避免反复冻融。

血浆： 使用EDTA、肝素或柠檬酸钠作为抗凝剂采集全血。采集后30分钟内1000 x g离心15分钟，收集血浆上清。储存同血清。

细胞培养上清： 离心去除细胞及碎片，收集上清，直接检测或分装冻存。

组织匀浆液：

将组织剪碎。

加入冰冷的PBS（推荐含有蛋白酶抑制剂），用组织匀浆器研磨。

离心（通常10000 x g，5分钟，2-8°C）。

收集上清液用于检测。分装冻存。

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