预期用途

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），用于体外定量检测人血清、血浆（肝素/EDTA/柠檬酸盐抗凝）、细胞培养上清液或其他生物液体中天然人Smad7蛋白的浓度。仅供科研使用，不用于临床诊断。

检测类型： 双抗体夹心法酶联免疫吸附测定 (Sandwich ELISA)

检测目标： 人转化生长因子β信号通路抑制因子Smad7蛋白

检测原理

预包被抗体： 微孔板孔内预先包被了高度特异性的抗人Smad7单克隆抗体作为捕获抗体。

样本/标准品孵育： 将含有Smad7的标准品或待测样本加入孔中。目标Smad7蛋白被预包被在孔底的抗体捕获并固定。

洗涤： 洗去未结合的蛋白质和其他物质。

检测抗体孵育： 加入生物素标记的高度特异性的抗人Smad7多克隆抗体（或单克隆抗体）。该抗体会与已捕获的Smad7蛋白形成夹心复合物（捕获抗体-Smad7-生物素标记抗体）。

洗涤： 再次洗去未结合的生物素标记抗体。

酶结合物孵育： 加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）。链霉亲和素会高亲和力地与生物素结合。

洗涤： 彻底洗去未结合的酶结合物。

显色反应： 加入无色的显色底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。HRP在过氧化氢存在下催化TMB氧化，生成蓝色产物。

终止反应： 加入酸性终止液终止反应，此时蓝色产物转变为黄色。

吸光度测量： 在450nm波长（主要吸收峰）下立即用酶标仪测定各孔的吸光度（OD值）。部分建议在570nm或630nm波长进行双波长校正，以扣除微孔板本身的干扰。

定量分析： 标准品孔的OD值与其浓度建立标准曲线（通常为四参数逻辑曲线或二次回归曲线）。样本中Smad7的浓度通过将其OD值代入标准曲线计算得出。

主要组分

| 组分 | 描述 | 规格 | 数量 | 保存条件 |

| 1 | 预包被抗人Smad7单抗板 | 96孔微孔板 | 1板 (12 x 8孔条) | 4°C (密封干燥保存) |

| 2 | 人Smad7 标准品 | 冻干粉或高浓度溶液 (例如: 5000 pg/mL) | 1管或瓶 | -20°C (或按指示) |

| 3 | 样品稀释液 (Assay Diluent) | 缓冲液 (含蛋白等)，用于稀释样本和标准品 | 1瓶 (如 30 mL) | 4°C |

| 4 | 生物素标记的抗人Smad7检测抗体 | 浓缩液 (例如: 100×) | 1瓶 (如 120 μL) | -20°C |

| 5 | HRP标记的链霉亲和素 (Streptavidin-HRP) | 浓缩液 (例如: 100×) | 1瓶 (如 120 μL) | -20°C (避光) |

| 6 | 洗涤缓冲液 (浓缩液) | 30× 或 20× PBS-Tween 20 | 1瓶 (如 30 mL) | 4°C (或室温) |

| 7 | TMB 显色底物 | 溶液 | 1瓶 (如 12 mL) | 4°C (避光) |

| 8 | 终止液 (Stop Solution) | 1M 或 2M H₂SO₄ 溶液 | 1瓶 (如 12 mL) | 4°C |

| 9 | 封板膜 (Plate Sealer) | 用于孵育时密封微孔板 | 3-4张 | 室温 |

| - | 备选/可能包含 | | | |

| 10 | 标准品/样品稀释板 | 用于稀释标准品/样本 | 1块 | - |

| 11 | 组分配置指导书 | | 1份 | - |

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