人17-酮类固醇(17-KS)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒采用竞争性酶联免疫吸附法（Competitive ELISA），用于定量检测人血清、血浆或尿液样本中的总17-酮类固醇 (17-KS) 浓度。17-KS是肾上腺皮质激素及部分性腺激素的代谢产物，其水平检测有助于评估肾上腺皮质功能及相关内分泌疾病（如库欣综合征、肾上腺肿瘤、先天性肾上腺皮质增生症等）。

检测原理

竞争法原理：

微孔板包被有特异性捕获抗体（抗17-KS抗体）。

样本（或标准品）中的游离17-KS与生物素标记的17-KS抗原（标记物）同时加入反应孔。

样本/标准品中的游离17-KS和生物素标记的17-KS共同竞争结合微孔板上有限的抗体结合位点。

洗板后，游离物质被洗去，结合的生物素标记物留在板上。

加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP），它与生物素特异性结合。

加入显色底物（TMB），酶催化反应产生蓝色产物。

加入终止液（通常是硫酸）终止反应，蓝色变为黄色。

使用酶标仪在 450nm（主波长，参考波长通常为 630nm或570nm）处测定吸光度（OD值）。

结果计算：

样本中的 17-KS 浓度 与 OD值 呈负相关。即样本中17-KS浓度越高，OD值越低。

通过绘制标准曲线（标准品浓度 vs OD值），即可计算出未知样本的浓度。

主要组分

| 组分名称 | 规格/数量 | 储存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔 (8孔x12条), 可拆卸 | 2-8°C |

| 17-KS 标准品 | 6-7个浓度梯度 (如：0, 1, 2.5, 5, 10, 20 ng/mL 或 nmol/L等) | -20°C (冻干品需复溶) |

| 生物素标记的17-KS (标记抗原) | 1瓶 | -20°C |

| HRP标记的链霉亲和素 (SA-HRP) | 1瓶 | 2-8°C |

| 酶结合物稀释液 | 1瓶 (用于稀释SA-HRP) | 2-8°C |

| 显色底物液 (TMB A/B) | A液, B液各1瓶 | 2-8°C (避光) |

| 终止液 (Stop Solution) | 通常为1M或2M硫酸溶液, 1瓶 | 2-8°C |

| 浓缩洗涤液 (Wash Buffer Concentrate) | 1瓶 (如20X或25X浓缩) | 2-8°C (使用前稀释) |

| 样本稀释液 (Sample Diluent) | 1瓶 (用于稀释样本, 视需而定) | 2-8°C |

| 封板膜 (Plate Sealers) | 数张 | 室温 |

| 产品说明书 | 1份 | 室温 |

样本要求与处理

样本类型： 血清 (推荐)、柠檬酸或EDTA抗凝血浆、24小时尿液。

血清/血浆采集：

常规静脉采血，避免溶血。静置30分钟完全凝集后离心 (通常1000-3000 xg, 10分钟)。收集澄清血清/血浆。

血清/血浆短期存放于 2-8°C（24-48小时），长期保存需分装后置于 -20°C 或 -70°C (避免反复冻融)。

尿液样本处理： (特别注意：检测的是总17-KS，通常需要酸解预处理)

收集完整24小时尿液于含防腐剂的容器中（按实验室规范）。

关键酸解步骤 (Glucosidase/Gluconidase水解)： 大多数方法要求在检测前需使用酸（如盐酸或使用商品化的水解酶试剂盒）将17-KS的结合物（如硫酸酯和葡萄糖醛酸苷）水解成游离形式。请严格遵循试剂盒说明书或实验室SOP进行水解操作。

酸解后，尿液需充分混匀、离心或稀释（按说明书要求），取上清进行检测。

注意： 所有样本在处理和使用前应恢复至室温（20-25°C）。离心去除可能存在的颗粒物质。

储存条件与有效期

未拆封试剂盒： 2-8°C 避光保存（请勿冷冻），避免强光照射。有效期见试剂盒外包装标签（通常12个月）。

开封后：

预包被板：放回有干燥剂的铝箔袋中密封，2-8°C保存（通常1个月内）。

标准品、标记物、SA-HRP浓缩液：按说明分装后 -20°C 或 -70°C 保存，避免反复冻融。

稀释后的工作液（如洗涤液、稀释液、酶结合物）：2-8°C保存，尽快使用（通常1周内有效）。

TMB底物：避光，2-8°C保存（通常2-4周有效）。

终止液：2-8°C保存。
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