大鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒采用高度灵敏的双抗体夹心ELISA技术，定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液以及组织匀浆液等样本中的天然和重组组织蛋白酶K (Cathepsin K, Cath-K) 的蛋白含量。

检测原理

包被： 试剂盒微孔板孔内预先包被了大鼠组织蛋白酶K的特异性单克隆抗体。

加样与结合： 将标准品、待测样本加入到相应孔中。样本中的组织蛋白酶K会被固相抗体捕获。

洗涤： 洗去未结合的物质。

加生物素化抗体： 加入生物素标记的大鼠组织蛋白酶K单克隆抗体，与已捕获的组织蛋白酶K结合，形成“固相抗体-抗原-生物素化抗体”复合物。

洗涤： 洗去未结合的生物素化抗体。

加链霉亲和素-HRP： 加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin)。链霉亲和素与生物素特异性结合。

洗涤： 洗去未结合的链霉亲和素-HRP。

显色： 加入底物溶液(TMB)。HRP催化TMB转化为蓝色产物。

终止与读数： 加入终止液（通常是酸性溶液）终止反应，颜色由蓝色变为黄色。使用酶标仪在450nm波长（参考波长可选540nm或570nm）下测量各孔的吸光度(OD值)。

定量计算： 根据标准品的浓度及其对应的OD值绘制标准曲线。待测样本中组织蛋白酶K的浓度可通过其OD值在标准曲线上查得。

试剂盒组分 (96孔板)：

| 组分 | 规格 | 数量 | 储存条件 |

| 预包被大鼠Cath-K抗体微孔板 | 8孔×12条 | 1块 | 2-8°C |

| 大鼠Cath-K标准品 | 200 ng/mL | 1瓶 | -20°C* |

| 样品稀释液 | - | 30 mL | 2-8°C |

| 生物素标记抗体稀释液 | - | 15 mL | 2-8°C |

| 浓缩生物素标记抗大鼠Cath-K抗体 | 100× | 120 μL | -20°C* |

| 浓缩链霉亲和素-HRP (SABC) | 100× | 120 μL | -20°C* |

| HRP稀释液 | - | 15 mL | 2-8°C |

| 浓缩洗涤缓冲液 (20×) | - | 25 mL | 2-8°C |

| TMB显色液 (底物A + 底物B) | 5 mL + 5 mL | 各1瓶 | 2-8°C (避光) |

| 终止液 (2M H₂SO₄) | - | 10 mL | 室温 |

| 封板膜 | - | 2-4张 | 室温 |

需要自备但未提供的器材与试剂

精密移液器及一次性吸头

酶标仪 (450nm ± 10nm 滤光片)

涡旋振荡器

洗板机 (或手动洗瓶、洗槽)

去离子水或超纯水（用于稀释20×洗涤液）

坐标纸/半对数纸或数据处理软件（用于绘制标准曲线）

样本收集管（EP管等）

-20°C冰箱、2-8°C冰箱、恒温箱或水浴锅（用于孵育）

计时器

一次性手套、实验服、护目镜（安全防护）
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