预期用途

用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆液或细胞培养上清液中的人p27蛋白浓度。

p27蛋白 (p27，也称CDKN1B或KIP1) 是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 (CDKI) 家族的重要成员。它通过抑制CDK2/cyclin E 和 CDK2/cyclin A 复合物的活性，在细胞周期G1期向S期的转换中发挥关键的负调控作用。p27蛋白的表达水平和亚细胞定位异常与多种肿瘤的发生、发展和预后密切相关，常被视为潜在的肿瘤抑制因子和预后标志物。本试剂盒采用高灵敏度的双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA)，专门设计用于准确、特异地定量检测各种生物样品中的人p27蛋白。

检测方法： 酶联免疫吸附法 (ELISA)，双抗体夹心法

检测原理

本试剂盒基于双抗体夹心法原理：

预包被： 微孔板的孔内预先包被有抗人p27特异性单克隆抗体。

加样： 将待测样品、标准品或质控品加入相应的孔中。样品中的p27蛋白会与孔内预包被的抗体结合。

洗涤： 洗去未结合的物质。

加生物素标记抗体： 加入生物素标记的抗人p27单克隆抗体，该抗体能与被捕获的p27蛋白上的不同表位结合，形成“包被抗体-抗原(p27)-生物素标记抗体”复合物。

洗涤： 再次洗去未结合的生物素标记抗体。

加酶标记物(链霉亲和素-HRP)： 加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的链霉亲和素。链霉亲和素与生物素之间具有高亲和力，能特异性结合生物素标记抗体。

洗涤： 洗去未结合的酶标物。

底物显色： 加入无色底物溶液四甲基联苯胺 (TMB)。在HRP的催化下，TMB转化为蓝色的产物。

终止反应： 加入终止液 (常用硫酸溶液) 终止酶促反应，此时蓝色转为黄色。

测量吸光度 (OD值)： 用酶标仪在450nm波长处（参考波长570nm或630nm用于双波长测定）测量各孔的吸光度值 (OD值)。

样品中p27蛋白的浓度与OD值成正比。 通过绘制标准曲线（标准品浓度 vs OD值），即可计算出样品中的p27浓度。

保存条件与稳定性

未开封试剂盒： 所有组分应在 2-8°C 条件下避光保存。

开封后：

微孔板：置于带有干燥剂的密封袋中，2-8°C保存。

标准品：复溶后（若为冻干粉）或开瓶后，根据试剂盒说明在-20°C分装保存或2-8°C短期保存。避免反复冻融。

生物素标记抗体和SA-HRP浓缩液：开启后根据说明在2-8°C或-20°C分装保存。

样品稀释液、1X洗涤液：2-8°C保存。

底物溶液(TMB)：严格避光保存于2-8°C（通常呈无色或淡黄色）。若颜色变深（蓝绿色）则不可使用。

终止液：室温或2-8°C保存。

有效期： 见试剂盒外包装标签，通常为 6个月至1年。请在有效期内使用。

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