预期用途

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆（EDTA/肝素）、细胞培养上清液等样本中人Preptin蛋白的浓度。

科学研究用途。仅供研究使用，不可用于诊断或治疗程序。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA） 原理。

预包被： 微孔板上预包被了抗人Preptin单克隆抗体（捕获抗体）。

结合： 加入样本或标准品，其中的Preptin蛋白会被捕获抗体特异性结合在微孔板上。

结合检测抗体： 清洗去除未结合的物质后，加入生物素标记的抗人Preptin检测抗体（二抗）。该抗体会与结合在板上的Preptin蛋白形成“夹心”复合物（Captured Preptin + Biotinylated Antibody）。

结合链霉亲和素-HRP： 再次清洗后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素。链霉亲和素会特异性结合生物素。

显色： 清洗去除未结合的酶结合物，加入底物工作液（如TMB）。在HRP的催化作用下，底物发生显色反应，颜色深度与样本中Preptin的浓度成正比。

终止与测量： 加入终止液（如硫酸溶液）终止反应，在450nm波长（有时需参考630nm作为参比波长）下测量各孔的吸光度值（OD值）。

定量计算： 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线方程计算样本中Preptin的浓度。

试剂盒主要组件

| 组件名称 | 规格/数量 | 保存条件 | 备注 |

| 预包被抗人Preptin微孔板 | 96孔 (8孔x12条) | 2-8°C (带干燥剂) | 已用抗体包被，可在板架上拆卸使用。 |

| 人Preptin标准品 (冻干粉) | 2瓶 x [浓度] ng* | 见包装 | *通常提供高浓度原液（如1000 pg/mL或更高），需用样本稀释液配制标准曲线系列浓度。 |

| 样本稀释液 | 15mL / 30mL / X mL | 2-8°C | 用于稀释血清/血浆样本和配制标准品。 |

| 检测抗体工作液 | 10mL / 15mL / X mL | 2-8°C | 生物素标记的抗人Preptin检测抗体，即用型。 |

| HRP-链霉亲和素工作液 | 10mL / 15mL / X mL | 2-8°C | 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，即用型。 |

| 浓缩洗涤液 (20X) | 25mL / 50mL / X mL | 2-8°C | 使用前需用去离子水稀释至1X工作浓度。 |

| 底物溶液 (TMB) | 10mL / 12mL / X mL | 2-8°C 避光 | 辣根过氧化物酶的显色底物溶液（如TMB），即用型。 |

| 终止液 | 10mL / 12mL / X mL | 室温或2-8°C | 终止反应（如2M H₂SO₄），有腐蚀性，操作需谨慎。 |

| 封板膜 | 4张 | 室温 | 用于孵育步骤覆盖微孔板。 |

| 说明书 | 1份 | 室温 | |

样本收集与处理

血清： 使用无热原、无菌采血管采集全血。室温凝固30分钟，1500 x g离心10分钟。小心吸取上层血清。避免溶血。

血浆： 使用含EDTA或肝素抗凝剂的采血管。采集全血后，在30分钟内于4°C 1000 x g离心15分钟。小心吸取上层血浆。避免溶血。

细胞培养上清液： 收集细胞培养液，离心去除细胞碎片，立即分装检测或于-20°C/-80°C保存。

保存： 分装后，样本可在-20°C保存约1个月，在-80°C保存更长时间（如6个月），避免反复冻融。检测前需将样本完全解融并平衡至室温，轻轻混匀后离心去除沉淀。

检测步骤

准备工作：

所有试剂平衡至室温（约30分钟）。预冷试剂除外。

根据需要配制洗涤工作液（1X）。

用样本稀释液完全溶解冻干标准品并配制标准曲线（通常6-8个梯度浓度，例如：0, [浓度1], [浓度2], ... [最高浓度] pg/mL)。

样本可能需要用样本稀释液进行适当稀释（稀释倍数需根据预期浓度探索）。

加样孵育：

在相应微孔中分别加入100µL标准品、稀释后的样本或空白对照（样本稀释液）。

封板，37°C孵育90分钟或按说明书特定时间。

洗涤： 弃去孔内液体。每孔加入300µL洗涤液，静置30秒后弃去（手动：重复3-4次；洗板机：按设定程序洗涤）。

加检测抗体： 每孔加入100µL检测抗体工作液。封板，37°C孵育60分钟。

洗涤： 同步骤3，洗涤3-4次。

加酶结合物： 每孔加入100µL HRP-链霉亲和素工作液。封板，37°C孵育30分钟。

洗涤： 同步骤3，洗涤3-5次。最后一次洗涤后扣干。

显色： 每孔加入100µL TMB底物溶液。封板，避光，室温（或37°C）孵育15-30分钟。密切观察颜色变化。

终止： 每孔加入50µL (或100µL，按说明书) 终止液。加入终止液后，蓝色立即变为黄色。

读数： 在加入终止液后30分钟内，用酶标仪在450nm（通常以630nm作为参比波长校正）读取各孔的吸光度（OD）值。

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