检测目标：人P53蛋白（野生型/突变型总蛋白）

应用：血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆

产品组成

| 组分 | 规格（96孔板） | 保存条件 |

| 预包被抗P53抗体板 | 1块 (8×12孔) | 2-8°C (干燥) |

| P53标准品 (重组蛋白) | 2×50 ng/mL | -20°C（冻干品） |

| 检测抗体（HRP标记） | 15mL | 2-8°C |

| TMB底物溶液 | 12mL | 避光2-8°C |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 12mL | 室温 |

| 洗涤缓冲液（25×） | 50mL | 2-8°C |

| 样本稀释液 | 30mL | 2-8°C |

检测原理

双抗体夹心法：

板孔预包被抗人P53单抗捕获样本中的P53蛋白。

加入HRP标记的二抗与结合物形成复合体。

TMB显色，450nm测OD值，P53浓度与吸光度正相关。

样本处理

| 样本类型 | 处理要求 |

| 血清/血浆 | 离心去除沉淀，避免反复冻融（稀释1:5起） |

| 细胞裂解液| RIPA裂解后离心取上清（总蛋白浓度建议1μg/μL） |

| 组织匀浆 | PBS匀浆后10,000×g离心15分钟 |

标准曲线范围

0.78 - 50 ng/mL（典型标准品梯度：0、0.78、1.56、3.12、6.25、12.5、25、50 ng/mL）

注：灵敏度 = 0.2 ng/mL

操作步骤

标准品/样本加样：每孔100μL，覆膜37°C孵育2小时。

洗涤：1×洗涤液洗板4次。

加检测抗体：每孔100μL，37°C孵育1小时。

洗板后显色：加TMB 90μL/孔，避光室温15分钟。

终止反应：加终止液50μL/孔，立即450nm读值。

结果计算

绘制标准曲线（浓度vs. OD值）。

样本浓度 = (计算值 × 稀释倍数)

性能参数

| 指标 | 数据 |

| 精密度（CV%） | 板内<8%，板间<10% |

| 回收率 | 85%-115% |

| 交叉反应 | 不与人BAX、MDM2反应 |

| 有效期 | 12个月（2-8°C避光） |

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