检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（Sandwich ELISA）。预先包被抗人Flt3特异性单克隆抗体于微孔板中，加入样本或标准品后，Flt3蛋白与包被抗体结合。加入生物素标记的检测抗体形成复合物，再与辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素结合，最终加入TMB显色。在450nm波长下测定吸光度（OD值），Flt3浓度与OD值呈正相关。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（48T） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔（8孔×12条） | 2–8°C |

| Flt3标准品（冻干粉） | 4管（10 ng/mL） | -20°C |

| 样本稀释液 | 15 mL | 2–8°C |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120 μL） | -20°C |

| HRP标记链霉亲和素 | 1瓶（120 μL） | 2–8°C（避光） |

| TMB底物溶液 | 10 mL | 2–8°C（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL | 室温 |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩液） | 30 mL | 室温 |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本处理

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，-80°C分装保存（避免反复冻融）。

细胞上清：离心去除沉淀后直接检测。

组织匀浆：裂解后10,000×g离心取上清。

建议检测前用样本稀释液1:2稀释，最终结果乘以稀释倍数。

标准曲线范围

0.156–10 ng/mL（梯度浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156 ng/mL）

灵敏度：≤0.05 ng/mL

实验步骤

标准品/样本加样：每孔加入100μL标准品或待测样本（复孔检测），37°C孵育90分钟。

洗涤：PBST缓冲液洗板3次（每次浸泡1分钟）。

加检测抗体：每孔加100μL生物素化抗体（1:100稀释），37°C孵育60分钟。

加酶结合物：每孔加100μL HRP-链霉亲和素（1:100稀释），37°C避光孵育30分钟。

显色：每孔加90μL TMB，室温避光反应15–20分钟。

终止与检测：每孔加50μL终止液，5分钟内测定450nm OD值（校正波长630nm）。

结果计算

计算复孔平均OD值。

以标准品浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（线性坐标），拟合四参数逻辑（4PL）曲线。

样本浓度 = 拟合曲线对应值 × 稀释倍数

R²≥0.99为有效标准曲线

性能参数

| 指标 | 数值 |

| 精密度（CV%） | 板内<8%，板间<10% |

| 回收率 | 85–115% |

| 交叉反应 | 与人FLT3配体（FL）无交叉反应 |

| 检测样本体积 | 100 μL |

注意事项

仅供科研使用，不用于临床诊断

避免反复冻融标准品

终止液为强酸，避免接触皮肤

TMB避光保存，显色时间过长可能导致背景升高

洗涤步骤需彻底，避免假阳性

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