产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA），用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆中的 IRAP 浓度。试剂盒具有高灵敏度、高特异性和重复性好的特点。

检测原理

预包被：微孔板预包被抗人IRAP单克隆抗体。

样本结合：加入样本或标准品，IRAP与包被抗体结合。

检测抗体：加入生物素标记的抗人IRAP检测抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物。

酶标记：加入链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）标记物。

显色：加入TMB显色底物，在HRP催化下显蓝色。

终止与读数：加入终止液后变黄色，在450nm波长测定吸光度（OD值），IRAP浓度与OD值成正比。

试剂盒组分

（以96孔板为例）

| 组分 | 体积/数量 | 保存条件 |

| 预包被IRAP抗体微孔板 | 96孔（8孔×12条） | 2–8°C |

| IRAP标准品（冻干粉） | 2管 | -20°C（复溶后4°C）|

| 样本稀释液 | 20mL | 2–8°C |

| 生物素标记检测抗体 | 1.5mL | -20°C |

| 链霉亲和素-HRP | 1.5mL | -20°C |

| TMB显色液 | 10mL | 避光2–8°C |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10mL | 2–8°C |

| 洗涤缓冲液（30×浓缩） | 30mL | 2–8°C（按需稀释）|

样本要求

样本类型：血清、EDTA血浆、细胞上清液、组织匀浆（离心后取上清）

处理方式：

血清/血浆：室温静置30分钟→ 2500 rpm离心15分钟 → 取上清检测

避免反复冻融，样本在4°C可保存3天，-20°C长期保存（分装）

操作步骤

准备试剂：标准品复溶，稀释至梯度浓度（如2000 → 31.25 pg/mL），样本按1:100稀释。

加样：每孔加100μL标准品/样本，37°C孵育90分钟。

洗板：弃液体，加洗涤液清洗3次。

加检测抗体：每孔加100μL生物素化抗体，37°C孵育60分钟 → 洗板。

加酶结合物：每孔加100μL链霉亲和素-HRP，37°C孵育30分钟 → 洗板。

显色：加90μL TMB避光孵育15–30分钟（显蓝色）。

终止：加50μL终止液（变黄色）。

检测：5分钟内测量450nm OD值（校正波长570nm）。

计算浓度

以标准品浓度（X轴）与OD值（Y轴）拟合标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值反算IRAP浓度，乘以稀释倍数即为实际浓度。

性能参数

| 项目 | 参数 |

| 检测范围 | 15.6–1000 pg/mL（典型范围） |

| 灵敏度 | ≤5 pg/mL |

| 精密度 | 批内CV <10%，批间CV <15%|

| 回收率 | 85–115% |

| 特异性 | 不与人其他白明酶交叉反应 |

注意事项

试剂使用前平衡至室温（约30分钟）。

终止液具强腐蚀性，请佩戴手套操作。

避免显色或洗涤步骤时微孔板干燥。

超出检测范围的样本需适当稀释复测。

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