产品概述

H-ras 基因是一种原癌基因，其编码的蛋白参与细胞信号转导。该试剂盒主要用于科研领域（部分可用于临床体外诊断，具体视说明书而定），定量测定人血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等样本中 H-ras 蛋白的含量。

核心原理：双抗体一步夹心法

试剂盒采用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）。

包被：酶标板微孔中已预包被捕获抗体。

反应：加入样本（含H-ras抗原）和酶标检测抗体，形成“捕获抗体-抗原-HRP标记抗体”的夹心复合物。

显色：加入底物TMB，在HRP酶的催化下转化为蓝色，酸化后变为黄色。

检测：颜色深浅与样本中H-ras的浓度呈正相关。在450nm波长下测定吸光度（OD值）。

试剂盒组成

组分名称 规格/参数 保存条件

酶标包被板 48孔 / 96孔 (可拆卸) 2-8℃保存

标准品 6管 (如 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25 ng/mL) 2-8℃保存

酶标试剂 (检测抗体) 6ml - 10ml 2-8℃保存

样品稀释液 6ml 2-8℃保存

浓缩洗涤液 20× 或 30× 浓缩液 2-8℃保存

显色剂 A & B 各6ml 2-8℃，避光

终止液 6ml (2M H₂SO₄) 2-8℃保存

封板膜 2张 室温

注：检测范围通常为 0.25 ng/mL – 8 ng/mL，灵敏度<0.1 ng/mL。

样本处理与保存

血清：

使用无热原、无内毒素的试管采集血液。

室温静置10-20分钟待血液凝固。

2000-3000 rpm/min 离心10-20分钟，小心收集上清液。

血浆：

使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

采集后混合均匀，2000-3000 rpm/min 离心10-20分钟，收集上清。

细胞/组织：

细胞上清：离心去除细胞碎片，取上清检测。

组织匀浆：用预冷的PBS冲洗组织，称重后按1:9（组织:PBS）比例进行匀浆，离心取上清。

注意事项：

避免溶血：溶血标本会增加非特异性显色。

保存：样本若不立即检测，应分装后于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

NaN3禁忌：样本中不能含有叠氮化钠（NaN3），因为它会抑制HRP酶的活性。

操作步骤

平衡：试剂盒从冰箱取出，平衡至室温（18-25℃），约需15-30分钟。

配液：将浓缩洗涤液按说明书比例（如1:20或1:30）用蒸馏水稀释。

加样：

设定空白孔（可不加）、标准品孔（各浓度梯度）和样本孔。

每孔加入50μl标准品或待测样本。

温育：除空白孔外，每孔加入酶标试剂100μl，用封板膜封板，37℃温育60分钟。

洗涤：弃去孔内液体，每孔注满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

显色：每孔加入显色剂A、B各50μl，37℃避光显色15分钟。

终止：每孔加入50μl终止液，轻轻震荡混匀。

读数：在450nm波长处测定吸光度（OD值），建议在加终止液后15分钟内完成读数。

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