产品概述

该试剂盒主要用于科研或临床体外诊断，定量或定性测定人血清、血浆、组织匀浆等样本中EB病毒IgM抗体的含量。

核心原理：双抗体夹心法

试剂盒采用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。

捕获：微孔板上预包被了EB病毒特异性抗原（或抗人IgM抗体），捕获样本中的EB病毒IgM抗体。

结合：加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的特异性抗体，与捕获的IgM形成“夹心”复合物。

显色：加入TMB底物，HRP催化底物显色（蓝色），颜色深浅与样本中EB病毒IgM的浓度呈正相关。

终止：加入终止液（强酸），颜色由蓝变黄，在450nm波长下测定吸光度（OD值）。

试剂盒组成

组分名称 规格 (以96T为例) 保存条件

酶标包被板 96孔 (12孔×8条) 2-8℃保存

标准品 6管 (0, 25, 50...400 pg/mL) 2-8℃保存

标准品稀释液 1.5ml - 6ml 2-8℃保存

酶标试剂 (HRP标记抗体) 6ml - 10ml 2-8℃保存

样品稀释液 6ml 2-8℃保存

浓缩洗涤液 20× 或 30× 浓缩液 2-8℃保存

显色剂 A & B 各6ml 2-8℃，避光

终止液 6ml (2M H₂SO₄) 2-8℃保存

封板膜 2张 室温

样本处理与保存

血清：

使用无热原、无内毒素的试管采集血液。

室温静置10-20分钟待血液凝固。

3000rpm/min 离心10-20分钟，小心收集上清液。

血浆：

使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

采集后混合均匀，3000rpm/min 离心10-20分钟，收集上清。

注意事项：

避免溶血：溶血标本会增加非特异性显色。

保存：样本若不立即检测，应分装后于-20℃保存，避免反复冻融。

NaN3禁忌：样本中不能含有叠氮化钠（NaN3），因为它会抑制HRP酶的活性。

操作步骤

平衡：试剂盒从冰箱取出，平衡至室温（18-25℃），约需15-30分钟。

配液：将浓缩洗涤液按说明书比例（如1:20或1:30）用蒸馏水稀释。

加样：

设定空白孔、标准品孔（各浓度梯度）和样本孔。

样本孔：先加40μl样品稀释液，再加10μl待测样本（最终稀释倍数通常为5倍）。

标准品孔：加入50μl不同浓度的标准品。

温育：用封板膜封板，37℃温育30-60分钟。

洗涤：弃去孔内液体，每孔注满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

加酶：每孔加入酶标试剂50μl（空白孔除外）。

温育与洗涤：重复步骤4和5。

显色：每孔加入显色剂A、B各50μl，37℃避光显色10-15分钟。

终止：每孔加入50μl终止液，轻轻震荡混匀。

读数：在450nm波长处测定吸光度（OD值），建议在加终止液后15分钟内完成读数。

注意事项

洗涤液结晶：浓缩洗涤液在低温下可能会有结晶析出。使用前需在37℃水浴中加温助溶，充分混匀后再进行稀释。

避光操作：显色剂（TMB）对光敏感，显色过程必须避光进行，否则背景会升高。

安全防护：

终止液为强酸（2M H₂SO₄），显色剂可能有毒性或致癌风险。操作时请佩戴手套、口罩和护目镜，避免直接接触皮肤或吸入蒸气。

加样准确：建议使用多通道加样器（排枪），一次加样时间**控制在5分钟内，以保证各孔反应时间一致。

洗涤彻底：洗板不彻底会导致背景过高或“花板”。拍干时不要将吸水纸直接插入孔中吸水。

标准曲线：建议每次实验都做标准曲线，不要使用过期的旧曲线。

废弃物处理：所有样品、洗涤液和废弃物都应视为具有传染性物质，按相关规定处理。

结果计算

定性：通常根据S/CO值（样本OD值/临界值OD值）判断。S/CO ≥ 1.0 为阳性，< 1.0 为阴性（具体阈值以说明书为准）。

定量：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（通常为四参数逻辑拟合或直线回归），根据样本的OD值在标准曲线上查出对应的浓度，最后乘以样本的稀释倍数，即为样本的实际浓度。

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