大鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法 (Sandwich ELISA) 定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物体液中的天然和重组ANG-4蛋白浓度。仅供体外研究使用 (For Research Use Only)。

检测原理

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA原理。

预包被： 微孔板上预先包被有能特异性结合大鼠ANG-4的捕获抗体 (Capture Antibody)。

加样： 将待测样本、标准品 (Standard) 和质控品 (Controls) 加入相应的微孔中。样本中的ANG-4蛋白会被孔板上的捕获抗体捕获。

洗涤： 洗去未结合的物质。

加检测抗体： 加入生物素标记的检测抗体 (Biotinylated Detection Antibody)，该抗体能特异性识别ANG-4蛋白的不同表位，形成“捕获抗体-ANG-4-检测抗体”复合物。

洗涤： 再次洗去未结合的检测抗体。

加酶结合物： 加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素 (Streptavidin-HRP)。链霉亲和素会与生物素标记的检测抗体高亲和力结合。

洗涤： 洗去未结合的酶结合物。

加底物显色： 加入显色底物溶液 (TMB)。HRP催化底物发生反应，产生蓝色产物。

终止反应： 加入终止液 (Stop Solution)，反应由蓝色转变为黄色。

读数： 在酶标仪上于450 nm波长 (参考波长：540 nm或570 nm) 读取各孔的吸光度 (OD值)。

定量分析： 标准品的浓度与其对应的OD值呈正相关。绘制标准曲线 (Log-Log或Log-Linear拟合)，根据样本的OD值即可在标准曲线上计算出样本中ANG-4的浓度。

样本要求

类型： 血清、血浆 (EDTA/肝素/柠檬酸盐抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆上清液。

处理：

血清/血浆：室温下血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右 (2000-3000 rpm/约1000×g)。仔细收集上清。避免溶血。分装后于-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心去除细胞碎片和杂质，收集上清，分装保存于-20°C或-80°C。

组织匀浆：将组织剪碎，用预冷的PBS (0.01M, pH7.4) 或试剂盒提供的稀释液匀浆。离心取上清，分装保存于-20°C或-80°C。

稀释： 建议在实验前根据预期浓度范围，用试剂盒提供的标准品/样品稀释液对样本进行预稀释。稀释倍数需在标准曲线范围内。未稀释样本通常需要1:2 - 1:10倍稀释，具体请参考说明书或预实验确定。切勿使用水或PBS直接稀释样本！

注意事项

仅供研究使用 (RUO)： 不可用于诊断或治疗。

样本处理： 避免样本溶血、反复冻融和细菌污染。处理样本时需戴手套，遵守生物安全规范。

避免污染： 使用洁净的吸头和试剂瓶。不同试剂使用专用吸头。避免试剂交叉污染。

温度控制： 确保孵育温度准确 (推荐使用水浴或温控精确的孵育箱)。

洗涤充分： 洗涤步骤至关重要，确保每次洗涤液加满孔，并彻底拍干，但避免孔板干燥。使用洗板机效果更佳。

显色时间： TMB显色时间需控制一致。显色过深可能导致OD值超出线性范围或酶标仪读数饱和。显色不足则灵敏度降低。密切观察颜色变化。

及时读数： 终止反应后应在规定时间内读数，避免颜色变化。

标准曲线： 每次实验都必须运行标准曲线。标准曲线拟合度R²应 > 0.99。

质控品： 强烈建议每次实验都运行质控品以监控实验性能。

安全： 终止液含有强酸，TMB有潜在致敏性，操作时需戴手套、护目镜，在通风橱或安全环境下操作。按实验室规定处理废液。
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