检测原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。预先包被抗c-Fos抗体的微孔板中，加入样本或标准品后，与生物素标记的检测抗体结合，形成免疫复合物。洗涤后加入HRP标记的链霉亲和素，通过TMB底物显色反应测定吸光度（OD值），样本中c-Fos浓度与OD值呈正相关。

试剂盒组分
（2-8℃保存）

| 组分名称 | 96孔配置 | 48孔配置 |

| 预包被微孔板 | 1×96孔 | 1×48孔 |

| c-Fos标准品（80 ng/mL）| 0.6 mL | 0.3 mL |

| 生物素标记抗体 | 6 mL | 3 mL |

| HRP标记链霉亲和素 | 10 mL | 5 mL |

| 洗涤缓冲液（20×） | 25 mL | 15 mL |

| TMB底物溶液 | 10 mL | 5 mL |

| 终止液 | 10 mL | 5 mL |

样本要求

样本类型：血清、血浆、细胞培养上清液（避免反复冻融）。

处理建议：离心去除颗粒物，稀释样本需使用试剂盒提供的稀释液。

操作步骤

标准品稀释：将标准品按梯度稀释至0.5-80 ng/mL。

加样：每孔加入100 μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后拍干，加入洗涤液静置1分钟，重复3次。

加检测抗体：每孔加入100 μL生物素标记抗体，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：洗涤后加入100 μL HRP标记链霉亲和素，37℃孵育30分钟。

显色：加入90 μL TMB底物，避光反应15-30分钟。

终止：每孔加入50 μL终止液，立即于450 nm波长测定OD值。

注意事项

试剂使用前需平衡至室温，避免反复冻融。

不同批次试剂不得混用。

显色时间需根据标准曲线梯度调整，超过30分钟可能影响准确性。

技术参数

检测范围：1.0-80 ng/mL（灵敏度≤0.3 ng/mL）。

精密度：板内变异系数＜10%，板间变异系数＜15%。

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