检测原理

试剂盒采用高度特异性的 抗人CD30单克隆抗体 预包被微孔板，通过双抗体夹心法检测样本中的人CD30抗原。实验流程如下：

捕获抗体：包被于96孔板的抗CD30抗体结合样本中的CD30抗原；

检测抗体：加入生物素标记的抗CD30二抗，形成“抗体-抗原-二抗”复合物；

信号放大：链霉亲和素-HRP（Streptavidin-HRP）与生物素结合；

显色反应：加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色→黄色）；

终止与读数：加终止液（硫酸）后450nm波长测定OD值，浓度与OD值正相关。

试剂盒组成

| 组件 | 规格（96T） | 保存条件 |

| 预包被CD30抗体微孔板 | 1块（12条×8孔） | 2-8℃ (干燥) |

| CD30标准品 | 2支（100 ng/mL） | -20℃ |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120 μL） | -20℃ |

| HRP标记链霉亲和素 | 1瓶（120 μL） | -20℃ |

| TMB显色底物 | 1瓶（10 mL） | 2-8℃（避光）|

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10 mL） | 室温 |

| 洗涤缓冲液（20×） | 1瓶（50 mL） | 2-8℃ |

样本要求

| 样本类型 | 处理方式 | 建议保存条件 |

| 血清 | 离心去除杂质（3000 rpm, 10 min）| -80℃（避免反复冻融）|

| 血浆（EDTA/肝素）| 同血清 | -80℃ |

| 细胞培养上清 | 离心去除沉淀 | -20℃/-80℃ |

注：避免使用溶血、脂血或浑浊样本。

标准曲线范围与灵敏度

检测范围：0.156 – 10 ng/mL（6个梯度稀释）

最低检测限（LOD）：0.05 ng/mL

标准曲线示例（需用户自拟合）：

| 标准品浓度 (ng/mL) | 10 | 5 | 2.5 | 1.25 | 0.625 | 0.156 | 空白 |

操作步骤

试剂准备：将所有组分平衡至室温（25℃），配制1×洗涤缓冲液。

标准品稀释：用标准品稀释液配制梯度浓度（参考范围表）。

加样：

标准品/样本：每孔加100 μL，覆膜，37℃孵育2小时。

洗涤：弃液，PBST洗板3次（每次静置30秒）。

加检测抗体：每孔100 μL生物素化抗体，37℃孵育1小时 → 洗板3次。

加酶结合物：每孔100 μL Streptavidin-HRP，37℃避光30分钟 → 洗板5次。

显色：每孔90 μL TMB底物，避光反应15-20分钟（蓝色）。

终止与读数：每孔50 μL终止液（变黄色），5分钟内于450nm测OD值（参考波长：570nm/630nm）。

结果计算

扣除空白孔OD值（建议取复孔均值）；

以标准品浓度为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴），拟合四参数曲线（4-PL）；

根据样本OD值计算CD30浓度（ng/mL）。

性能参数

精密度：板内变异系数（CV）< 8%，板间CV < 10%；

特异性：不与CD27、CD40、TNF-α等交叉反应；

回收率：85–115%（血清/血浆验证）；

稳定性：未开封试剂盒有效期12个月，开封后微孔板需密封干燥保存。

注意事项

不同批次试剂不可混用；

TMB对光敏感，需避光操作；

高危试剂：终止液（2M H₂SO₄）具有强腐蚀性，需佩戴防护装备；

结果超出标准曲线范围时，需稀释样本后重测。

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