产品概述

人CREB ELISA试剂盒主要用于科研领域，用于测定人血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆中CREB的含量。

核心原理：双抗体夹心法

试剂盒采用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。简单来说，就是利用已知浓度的标准品和未知样品与抗体结合，通过酶催化底物显色，颜色的深浅与样品中CREB的浓度呈正相关。

试剂盒组成

组分名称 规格 (以96T为例) 保存条件

酶标包被板 96孔 2-8℃保存

标准品 0.6ml/瓶 (如400pg/ml) 2-8℃保存

标准品稀释液 5ml/瓶 2-8℃保存

生物素标记抗体 6ml/瓶 2-8℃保存

亲和素标记HRP 10ml/瓶 2-8℃保存

浓缩洗涤液 20ml/瓶 (如20×或30×) 2-8℃保存

底物A & B 各6ml 2-8℃，避光

终止液 6ml (通常为2M H₂SO₄) 2-8℃保存

操作步骤

准备： 所有试剂使用前需平衡至室温（约15-30分钟），洗涤液如有结晶需水浴溶解。

加样： 分别设标准品孔和样本孔。标准品加入不同浓度的标准液，样本孔加入待测样本（通常需稀释）。

温育与洗涤：

加入生物素标记抗体，37℃温育一定时间（如1小时）。

洗涤去除未结合物。

加入HRP标记的亲和素/酶结合物，37℃避光温育。

再次洗涤。

显色与终止： 加入底物TMB（A液+B液），37℃避光显色（通常15-30分钟），最后加入终止液（溶液由蓝变黄）。

读数： 在450nm波长处测定吸光度（OD值），参考波长通常为570nm或630nm。

样本处理与保存

血清： 使用不含热原和内毒素的试管，收集后1000×g离心10分钟分离。

血浆： 可使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，离心后取上清。

细胞/组织： 细胞上清离心去除颗粒；组织需加入生理盐水捣碎制成匀浆，离心取上清。

保存： 样本若不立即检测，应分装后于-20℃或-70℃保存，避免反复冻融。

注意事项

避光操作： 底物B（TMB）对光敏感，显色过程必须避光进行。

安全防护： 终止液通常是强酸（如2M硫酸），底物可能有毒性，操作时请佩戴手套和护目镜，避免直接接触。

加样准确： 建议使用多通道加样器（排枪），一次加样时间**控制在5分钟内，以保证各孔反应时间一致。

复孔检测： 建议标准品和样本都做复孔（双复孔），以减少误差。

标准品现配： 稀释后的标准品通常不可保存，需在实验时现配现用。

洗涤彻底： 洗板时要注满洗液，拍干时不要将吸水纸直接放入孔中吸水，以免污染。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，根据样本的OD值在标准曲线上查出对应的浓度，最后乘以样本的稀释倍数，即为样本的实际浓度。

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