预期用途

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定 (Sandwich ELISA) 技术，用于定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆液中的大鼠白介素1β (IL-1β) 蛋白浓度。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法：

包被：试剂盒提供的微孔板预先包被了抗大鼠IL-1β单克隆抗体。

加样：将样本（待测样本或标准品）加入微孔中，样本中的大鼠IL-1β与包被在板上的抗体特异性结合。

洗涤：洗去未结合的物质。

加检测抗体：加入生物素标记的抗大鼠IL-1β抗体（检测抗体），与已结合的IL-1β形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

洗涤：再次洗去未结合的物质。

加酶结合物：加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素 (Streptavidin-HRP)，生物素与链霉亲和素发生高亲和力结合。

洗涤：洗去未结合的酶结合物。

显色：加入底物溶液 (TMB)，HRP催化TMB产生蓝色产物。

终止反应：加入终止液 (一般为酸性溶液)，反应终止，颜色由蓝色变为黄色。

比色测定：使用酶标仪在450 nm波长（参考波长630 nm或570 nm）下测定各孔的吸光度值 (OD值)。

结果计算：根据标准品浓度及其对应的OD值绘制标准曲线，通过标准曲线方程计算待测样本中的IL-1β浓度。

样本类型

血清： 使用血清分离管采集血液，室温凝固10-20分钟，1000 × g 离心20分钟，取上层澄清血清。避免溶血。

血浆： 使用EDTA或肝素抗凝管采集血液，30分钟内1000 × g 离心20分钟，取上层澄清血浆。

细胞培养上清： 收集上清液，1000 × g 离心20分钟去除细胞碎片。

组织匀浆液： 将新鲜或冷冻的组织称重，用预冷的PBS或试剂盒推荐的匀浆缓冲液匀浆 (如1g组织加入9mL缓冲液)，然后12,000 × g 离心20分钟，取上清用于检测。稀释倍数会影响最终浓度计算。

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