产品概述

检测目标：大鼠白介素32 (IL-32)

检测原理：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）

样本类型：血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆

检测范围：典型范围 15.6 pg/mL ~ 1000 pg/mL

灵敏度：通常 < 5 pg/mL

检测时间：约 3.5 - 4.5 小时

保存条件：试剂盒组分需在 2-8°C 避光保存（长期不用建议分装冻存于-20°C）

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被抗大鼠IL-32微孔板 | 96孔板（可拆卸） | 1块 |

| 大鼠IL-32标准品 | 冻干粉或液体（浓度梯度） | 1套 |

| 生物素标记检测抗体 | 1.5 mL | 1瓶 |

| 辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素 | 1.5 mL | 1瓶 |

| 样本稀释液 | 20 mL | 1瓶 |

| 检测抗体稀释液 | 10 mL | 1瓶 |

| TMB底物溶液 | 10 mL | 1瓶 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL | 1瓶 |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩液） | 50 mL | 1瓶 |

| 封板膜 | - | 4张 |

操作步骤

样本准备：

血清/血浆：离心去除颗粒，避免溶血。

组织：匀浆后离心取上清。

所有样本需用样本稀释液按说明书比例稀释。

标准品复溶与稀释：

用标准品稀释液配制系列浓度（如：0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）。

加样与孵育：

每孔加入标准品/样本 100 μL → 37°C 孵育 90 分钟。

洗板 3 次（用1×洗涤缓冲液）。

加检测抗体：

每孔加入生物素化抗体 100 μL → 37°C 孵育 60 分钟。

洗板 3 次。

加酶结合物：

每孔加入 HRP-链霉亲和素 100 μL → 37°C 孵育 30 分钟（避光）。

洗板 5 次。

显色与终止：

每孔加入 TMB 底物 90 μL → 37°C 避光显色 15-30 分钟（显蓝色）。

每孔加入终止液 50 μL → 颜色转为黄色。

检测：

30分钟内用酶标仪读取 450 nm 波长吸光度（OD值）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标（log值），OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

样本浓度通过标准曲线方程计算（建议使用四参数拟合软件）。

若样本被稀释，需乘以稀释倍数。

注意事项

样本稳定性：新鲜样本立即检测**，2-8°C可保存48小时，长期保存需分装于-80°C。

避免污染：不同试剂使用专用吸头，避免交叉污染。

洗板关键：每次洗板需拍干孔内液体，确保无残留。

显色控制：显色时间过长可能导致背景过高，建议预实验确定**时间。

安全防护：终止液为强酸，操作时戴手套/护目镜。

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