检测原理

采用双抗体夹心ELISA法：

预包被抗大鼠IL-2R抗体于微孔板

加入样本或标准品，IL-2R与抗体结合

加入生物素标记检测抗体，形成“抗体-抗原-检测抗体”复合物

加入辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素

加入TMB底物显色，颜色深浅与IL-2R浓度成正比

检测指标

靶标分子：大鼠白介素2受体（IL-2R，含IL-2Rα/CD25亚基）

检测类型：定量检测

检测样本：血清、血浆、细胞培养上清液、组织裂解液

试剂盒组分

| 组分 | 规格（96T） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔 | 2-8°C |

| 大鼠IL-2R标准品 | 2支 | -20°C |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120μL）| -20°C |

| HRP标记链霉亲和素 | 1瓶（120μL）| -20°C（避光）|

| 样本稀释液 | 1瓶（20mL） | 2-8°C |

| TMB显色底物 | 1瓶（10mL） | 2-8°C（避光）|

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10mL） | 2-8°C |

| 洗涤液（20×浓缩） | 1瓶（25mL） | 2-8°C |

需自备设备与试剂

酶标仪（450nm波长）

微量移液器及枪头

蒸馏水或去离子水

恒温孵育箱（37°C）

洗板机（或手动洗板装置）

样本处理

| 样本类型 | 处理建议 |

| 血清/血浆 | 离心去除杂质，避免反复冻融（-80°C长期保存）|

| 细胞上清 | 离心去除细胞碎片，直接检测 |

| 组织匀浆 | 裂解后离心取上清，稀释至合适浓度 |

注：避免使用溶血、高脂血样本。

标准曲线范围

典型范围：15.6 pg/mL - 1000 pg/mL

灵敏度：< 5 pg/mL（最低检测限）

操作步骤

标准品稀释：用样本稀释液梯度稀释标准品（0, 15.6, 31.25, 62.5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL）

加样：标准品/样本各100μL加入微孔，37°C孵育90分钟

洗板：洗板液洗涤3次

加检测抗体：每孔加100μL生物素化抗体，37°C孵育60分钟

洗板：洗涤3次

加酶结合物：每孔加100μL HRP-链霉亲和素，37°C避光孵育30分钟

洗板：洗涤5次

显色：每孔加90μL TMB，37°C避光显色15-20分钟

终止：每孔加50μL终止液

读值：450nm波长测定OD值（630nm参比波长校正）

结果计算

绘制标准曲线（横坐标：标准品浓度对数；纵坐标：OD值）

根据样本OD值，从标准曲线计算IL-2R浓度

样本浓度 = 曲线测定值 × 稀释倍数

性能参数

精密度：板内变异系数（CV）< 8%，板间CV < 10%

回收率：85%-115%

特异性：不与大鼠IL-4R、IL-6R等交叉反应

注意事项

所有试剂使用前平衡至室温（20-25°C）

避免反复冻融标准品及检测抗体

TMB显色时间需优化，强阳性样本可能出现显色过深

严格遵守生物安全规范处理终止液（含硫酸）

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