大鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒

产品基本信息

| 检测物种 | 大鼠（Rat） |

| 检测样本类型 | 血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清 |

| 检测目标 | S100蛋白（S-100A1/S-100B等亚型） |

| 检测方法 | 双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA） |

| 灵敏度 | ≤5 pg/mL |

| 检测范围 | 15.6 - 1000 pg/mL |

| 精密度 | 板内变异系数（CV）< 8%，板间CV< 10% |

| 储存条件 | 2~8℃避光保存 |

| 有效期 | 12个月（详见外包装标签） |

检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术：

预包被抗体：96孔板预先包被抗大鼠S100单克隆抗体。

样本孵育：样本中的S100蛋白与包被抗体结合。

检测抗体：加入生物素标记的二抗，形成“抗体-抗原-二抗”复合物。

酶标记物：添加链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）结合物。

显色反应：加入TMB底物，HRP催化显蓝色。

终止检测：加入终止液（酸性溶液）后变黄色，450nm波长测定OD值。

试剂盒组分

（96孔装）

| 组分名称 | 数量/规格 | 保存条件 |

| 预包被S100抗体96孔板 | 1块（可拆卸） | 2~8℃ |

| 大鼠S100标准品 | 2×冻干粉（含说明书） | -20℃ |

| 样本稀释液 | 30mL | 2~8℃ |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120μL） | -20℃ |

| 链霉亲和素-HRP结合物 | 1瓶（120μL） | -20℃ |

| TMB底物溶液 | 12mL | 2~8℃避光|

| 终止液（2M H₂SO₄） | 12mL | 2~8℃ |

| 20×洗涤缓冲液（浓缩液） | 30mL | 2~8℃ |

| 封板膜 | 4张 | RT |

样本处理要求

血清/血浆：采集后1小时内离心（3000rpm, 10min），避免溶血。分装后-80℃冻存。

组织匀浆：按重量比1:9加入PBS，匀浆后离心（10,000rpm, 15min），取上清检测。

细胞上清：直接离心去除沉淀，避免反复冻融。

建议：所有样本检测前进行一次稀释预实验，确保结果在标准曲线范围内。

操作步骤概要

稀释标准品：用标准品稀释液梯度稀释（0-1000pg/mL）。

加样：每孔加100μL样本/标准品，37℃孵育90分钟。

洗板：用1×洗涤液洗板4次。

加检测抗体：每孔加100μL生物素化抗体，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：每孔加100μL酶结合物，37℃避光孵育30分钟。

显色：每孔加90μL TMB底物，37℃避光反应15~20分钟（显蓝色）。

终止：每孔加50μL终止液（变黄色）。

读数：5分钟内于450nm波长读取OD值（参考波长630nm）。

数据处理

以标准品浓度为横坐标（Log值），OD450值为纵坐标，拟合标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值计算S100浓度。超出检测范围需调整稀释比例重测。

注意事项

避免交叉污染：使用一次性吸头，不同样本间更换枪头。

洗板彻底：洗涤液残留可能导致假阳性。

温育时间控制：严格控制反应时间确保线性关系。

酶失活风险：避免链霉亲和素-HRP接触叠氮钠等抑制剂。

安全操作：终止液含强酸，佩戴手套操作。
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