检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清中的γ干扰素（IFN-γ）。将抗IFN-γ单克隆抗体预包被于微孔板中，加入待测样本及标准品后，IFN-γ与固相抗体结合，再依次加入生物素化检测抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，形成复合物。经洗涤后，加入底物TMB显色，终止反应后测定450 nm波长下的吸光度（OD值），其强度与样本中IFN-γ浓度呈正相关，通过标准曲线计算浓度。

样本要求

血清/血浆：采集后需离心（3000 rpm，10分钟）分离，避免溶血或反复冻融，-20℃或-80℃保存。

细胞上清：离心去除颗粒物，分装冻存于-80℃。

试剂盒组成

（以96孔配置为例）

预包被微孔板

IFN-γ标准品（浓度梯度）

生物素化检测抗体

HRP标记链霉亲和素

TMB显色液、终止液

洗涤缓冲液（浓缩液）

封板膜、说明书

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释至目标浓度（如0–500 pg/mL）。

加样与孵育：每孔加入样本或标准品100 μL，37℃孵育90分钟，洗涤3次。

检测抗体孵育：加入生物素化抗体，37℃孵育60分钟，洗涤3次。

酶结合物反应：加入HRP标记物，37℃避光孵育30分钟，洗涤5次。

显色与终止：加入TMB显色液，避光反应15分钟，终止后30分钟内检测OD值。

注意事项

质量控制：建议每板设置复孔、空白孔及标准曲线。

干扰因素：避免样本反复冻融或含沉淀物；微孔板洗涤需彻底，防止假阳性。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

技术参数

灵敏度：通常≤5 pg/mL。

检测范围：15.6–1000 pg/mL（具体以试剂盒批次为准）。

精密度：板内变异系数（CV）<10%，板间CV<15%。

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