大鼠Smad7 ELISA试剂盒

试剂盒参数

检测靶标：Smad7（Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7）

检测原理：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）

灵敏度：≤ 10 pg/mL

检测范围：31.25 pg/mL – 2000 pg/mL

样本类型：血清、血浆（肝素/EDTA/柠檬酸盐抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆液

保存条件：2–8°C避光保存（未开封），有效期12个月

适用仪器：标准酶标仪（450 nm波长）

试剂盒组分

| 组分名称 | 96孔板规格 | 保存条件 |

| 预包被抗大鼠Smad7抗体微孔板 | 96孔 | 2–8°C（干燥）|

| Smad7标准品（冻干粉） | 2管 | -20°C |

| 生物素化检测抗体 | 1瓶（120 μL） | 2–8°C |

| 辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素 | 1瓶（120 μL） | 2–8°C |

| 样本稀释液 | 1瓶（20 mL） | 2–8°C |

| 标准品/检测抗体稀释液 | 1瓶（10 mL） | 2–8°C |

| TMB显色底物（避光） | 1瓶（10 mL） | 2–8°C |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10 mL） | 室温 |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩液） | 1瓶（30 mL） | 室温 |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本处理要求

| 样本类型 | 预处理方法 | 建议稀释倍数 |

| 血清/血浆 | 3000 rpm离心10分钟，取上清 | 1:1–1:5 |

| 细胞上清液 | 离心去除沉淀，直接检测或稀释 | 1:1–1:10 |

| 组织裂解液 | 研磨后离心取上清，用PBS稀释（总蛋白≤2 mg/mL）| 1:5–1:20 |

注意：避免反复冻融样本，建议分装保存于-80°C。

检测流程

1. 标准品与样本准备

用1 mL 标准品稀释液复溶冻干标准品，静置15分钟后混匀，梯度稀释为以下浓度：

2000, 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25 pg/mL（零孔用稀释液代替）。

样本用样本稀释液按预实验确定的倍数稀释。

2. 加样与孵育

每孔加入100 μL标准品/稀释样本，37°C孵育90分钟。

弃液，用1×洗涤缓冲液（20×浓缩液用蒸馏水稀释）洗板3次。

每孔加入100 μL生物素化检测抗体，37°C孵育60分钟。

洗板3次。

每孔加入100 μL HRP-链霉亲和素，37°C避光孵育30分钟。

洗板5次。

3. 显色与终止

每孔加入90 μL TMB显色底物，37°C避光孵育15–20分钟（显蓝色）。

每孔加入50 μL 终止液（颜色变为黄色）。

立即用酶标仪在450 nm波长下读取OD值（建议在5分钟内完成）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标（log值），OD450值为纵坐标，拟合标准曲线（四参数逻辑曲线推荐）。

根据样本OD值从曲线方程计算Smad7浓度。

最终浓度 = 曲线计算值 × 样本稀释倍数。

注意事项

不同批号试剂不可混用。

TMB显色液对光敏感，需避光操作。

洗涤步骤需彻底，避免交叉污染。

高浓度样本需稀释至检测范围内，否则结果不准确。

若OD值超出标准曲线范围，请调整样本稀释倍数后重新检测。

性能参数

精密度：板内变异系数（CV）< 8%，板间CV < 12%

回收率：85–115%

特异性：不与大鼠Smad1/2/3/5发生交叉反应
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