大鼠Toll样受体4(TLR4)ELISA试剂盒

产品用途

本试剂盒用于体外定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清或组织匀浆中的TLR4蛋白含量，仅供科研使用，不适用于临床诊断。

检测原理

采用双抗体夹心ELISA法。包被抗TLR4抗体与样本中TLR4结合，再加入生物素标记的二抗，形成免疫复合物后通过HRP标记的链霉亲和素催化底物显色，吸光度（OD值）与TLR4浓度成正比。

试剂盒组成

| 组分名称 | 96T配置 | 48T配置 | 备注 |

| 预包被微孔板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 可拆卸 |

| TLR4标准品 | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 | 浓度梯度：0-20 ng/mL|

| 样本稀释液 | 6 mL | 3 mL | 无菌PBS缓冲液 |

| 检测抗体-HRP | 10 mL | 5 mL | 避光保存 |

| 20×洗涤缓冲液 | 25 mL | 15 mL | 使用前稀释至1× |

| 底物A/B | 各6 mL | 各3 mL | TMB显色，避光 |

| 终止液 | 6 mL | 3 mL | 2M硫酸溶液 |

| 封板膜、说明书 | 2张/1份 | 2张/1份 | - |

样本处理

血清/血浆：采集后3000 rpm离心10分钟，避免溶血或脂血干扰。

组织匀浆：按1:9（w/v）加入PBS匀浆，离心取上清。

细胞上清：离心去除沉淀，直接检测或-20℃分装保存（避免反复冻融）。

操作步骤

平衡：试剂盒室温平衡30分钟，预冷样本需完全解冻。

加样：标准品/样本各50 μL/孔，设复孔，立即加入50 μL生物素化抗体。

温育：37℃孵育1小时，洗板3次（手工或洗板机）。

显色：每孔加底物A/B各50 μL，37℃避光反应10分钟。

终止：加入50 μL终止液，15分钟内450 nm测OD值。

注意事项

储存：未开封试剂盒2-8℃保存，有效期6个月；开封后板条需密封防潮。

校准：加样器需定期校准，避免气泡干扰。

交叉污染：更换吸头/封板膜，不同批号试剂不可混用。

安全：终止液含强酸，需佩戴防护装备。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

样本浓度通过曲线方程计算，稀释样本需乘以稀释倍数。

性能参数

灵敏度：最低检测限0.1 ng/mL。

线性范围：0.2-15 ng/mL（R²≥0.99）。

回收率：85%-115%，批内/批间变异系数<10%。
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