使用目的

本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞上清液或其他组织液中的肿瘤坏死因子β（TNF-β）含量，适用于科研及临床研究。

实验原理

采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。具体步骤如下：

包被抗体：微孔板预包被高纯度人TNF-β捕获抗体。

抗原结合：加入待测样本或标准品，TNF-β与固相抗体结合。

酶标抗体反应：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：洗涤后加入底物TMB，在HRP催化下生成蓝色产物，酸性终止液转化为黄色。

定量分析：450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中TNF-β浓度。

试剂盒组成

20倍浓缩洗涤液（50 mL×1瓶）

酶标试剂（HRP标记抗体，6 mL×1瓶）

标准品（270 ng/L，0.5 mL×1瓶）

底物TMB（6 mL×1瓶）

终止液（6 mL×1瓶）

封板膜、说明书及质控证书

样本处理与保存

血清：无菌采血后3000 rpm离心10分钟，避免溶血或反复冻融。

血浆：建议使用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝，3000 rpm离心30分钟取上清。

细胞上清液：离心去除颗粒后分装保存于-80℃。

组织匀浆：生理盐水匀浆后离心取上清。

注意事项

试剂盒需在2-8℃保存，复溶后的标准品建议分装冻存。

避免反复冻融样本，操作时需佩戴防护用具。

不同批次试剂组分不可混用。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合方程计算样本浓度。

技术参数

检测范围：15-1000 ng/L

灵敏度：<5 ng/L

批内/批间变异系数：均<10%

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