产品用途

本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞上清液或组织匀浆等样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量，适用于科研用途。

实验原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）：

包被抗体：微孔板预包被高纯度人TNF-α捕获抗体，形成固相抗体。

抗原结合：样本中的TNF-α与固相抗体结合后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：加入底物TMB（四甲基联苯胺），在HRP催化下生成蓝色产物，酸性终止液作用后转为黄色。

定量分析：在450 nm波长下测定吸光度（OD值），OD值与TNF-α浓度呈正相关，通过标准曲线计算样本浓度。

样本类型

适用样本：人血清、血浆（需抗凝处理）、细胞培养上清液、组织匀浆等。

样本处理：避免反复冻融，离心去除颗粒物，-20℃或-80℃保存。

试剂盒组成

预包被微孔板

TNF-α标准品（梯度浓度）

HRP标记检测抗体

TMB显色液、终止液

洗涤缓冲液（浓缩液需稀释）

封板膜、说明书

操作步骤

标准品稀释：按说明书配制系列浓度标准品。

加样孵育：依次加入标准品、待测样本至微孔，37℃孵育。

洗涤：弃液后使用洗涤液清洗3-5次。

酶标抗体孵育：加入HRP标记抗体，37℃反应。

显色与终止：加入TMB避光显色，终止后30分钟内检测。

注意事项

试剂盒需2-8℃保存，避免冷冻或强光照射。

不同批次试剂不可混用，标准品需现配现用。

操作时需佩戴防护用具，避免接触终止液等腐蚀性液体。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。若样本OD值超出标准范围，需适当稀释后复测。

性能参数

灵敏度：通常≤1 pg/mL。

检测范围：15-1000 pg/mL。

特异性：与人TNF-β、IL-6等常见细胞因子无交叉反应。

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