预期用途

本试剂盒采用酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液及其他生物体液中的二胺氧化酶（DAO）含量。DAO是一种催化二胺类物质（如组胺、腐胺）氧化的细胞内酶，主要分布于小肠黏膜绒毛，其活性与黏膜细胞功能及绒毛高度密切相关，可作为小肠黏膜结构与功能的生物标志物，亦与某些肿瘤发生相关。

检测原理

双抗体夹心法：

包被：微孔板预包被抗人DAO单克隆抗体。

结合：样本中的DAO与包被抗体结合后，加入生物素化抗人DAO抗体形成复合物。

信号放大：辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素与生物素结合，催化底物TMB显色（蓝色→黄色）。

检测：450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算DAO浓度。

一步法（部分试剂盒）：

直接加入HRP标记检测抗体，简化温育步骤，显色原理相同。

试剂盒组成

预包被酶标板：96孔

酶标抗体工作液：12 mL

标本稀释液（10×）：12 mL

浓缩洗涤液（20×）：50 mL

标准品：10 U/瓶（冻干粉或液体）

底物（TMB）、终止液、封板膜等

样本处理

血清：无菌采血后3000 rpm离心10分钟，避免溶血或反复冻融。

血浆：建议使用EDTA/肝素抗凝，3000 rpm离心30分钟取上清。

细胞上清液：离心去除颗粒后分装保存于-80℃。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释。

加样：每孔加入样本或标准品100 μL，37℃温育1小时。

洗涤：用洗涤液洗板5次，拍干。

加检测抗体：加入生物素化抗体或HRP标记抗体，37℃温育30分钟。

显色：加入TMB底物，避光反应15分钟，终止后读取OD值。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

试剂使用前需平衡至室温，避免反复冻融标准品。

不同批次试剂不可混用，样本需避免细菌污染。

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