检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法：

捕获抗体：抗人CREB单克隆抗体预包被于微孔板。

样本/标准品：与捕获抗体结合。

检测抗体：生物素标记的抗人CREB多克隆抗体。

信号放大：链霉亲和素-HRP偶联物与生物素结合。

显色反应：TMB底物经HRP催化显蓝色，终止液变黄色。

定量检测：450nm波长下测定OD值，CREB浓度与OD值正相关。

检测目标: 人cAMP反应元件结合蛋白（CREB）

样本类型: 细胞裂解液、组织匀浆、血清、血浆

检测形式: 夹心法ELISA（双抗体位点）

适用仪器: 标准微孔板酶标仪（450nm）

组分与储存

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔（可拆卸） | 2–8°C干燥 |

| CREB标准品（冻干粉） | 2瓶（40 ng/mL重建后） | -20°C |

| 样本稀释液 | 30 mL | 2–8°C |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120 μL） | -20°C |

| 链霉亲和素-HRP | 1瓶（120 μL） | -20°C避光 |

| TMB显色底物 | 1瓶（10 mL） | 2–8°C避光 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10 mL） | 2–8°C |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩） | 1瓶（50 mL） | 2–8°C |

注：所有组分使用前恢复至室温（18-25°C），开封后按说明书保存。

样本制备

细胞裂解液：

使用预冷RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂）。

离心（12,000×g, 10min）取上清。

蛋白浓度建议调整至1-2 mg/mL。

血清/血浆：

避免溶血，EDTA抗凝血浆。

离心去除杂质（1,500×g, 10min）。

组织匀浆：

组织碎片加入PBS（重量:体积=1:9）匀浆后离心取上清。

建议：所有样本分装后于-80°C保存，避免反复冻融。

标准曲线范围与灵敏度

检测范围：0.312–20 ng/mL

最低检测限（LOD）：0.156 ng/mL

批内精密度：CV < 8%

批间精密度：CV < 10%

实验步骤

标准品重建：用稀释液溶解标准品，梯度稀释7个浓度点（20 → 0.312 ng/mL）。

加样：

标准品/样本各100μL加入微孔，37°C孵育2小时。

洗板：自动洗板机洗3次（或手动冲洗5次）。

加检测抗体：100μL/孔，37°C孵育1小时。

加酶结合物：100μL/孔，37°C孵育30分钟。

显色：加入TMB底物100μL/孔，避光室温反应15分钟。

终止：加入50μL终止液。

读值：450nm波长（校正波长540/570nm）测定OD值。

结果计算

制作标准曲线（浓度 vs. OD值），推荐四参数拟合（4PL）。

样本浓度=OD值代入曲线方程×稀释倍数。

公式示例：

[ \text{浓度} (\text{ng/mL}) = \frac{\text{样本OD值} - b}{m} \times D ]

（(D)=稀释倍数；(m)=斜率；(b)=截距）

注意事项

关键控制点:

避免孔间交叉污染（使用排枪）。

TMB孵育时间需严格一致（建议设定时器）。

洗涤步骤务必充分（残留洗涤液影响背景值）。

样本浓度＞20 ng/mL需进一步稀释。

公司正在出售的产品