大鼠雄激素(androgen)ELISA试剂盒

试剂盒基本原理

原理：利用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体。向微孔中加入标准品或待测样本，同时加入酶标抗体（如HRP标记的亲和素或检测抗体）。

显色反应：经过温育和彻底洗涤后，加入底物TMB。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，并在酸的作用下最终变为黄色。

检测：颜色的深浅与样品中雄激素的含量呈正相关。

读数：使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），并根据标准曲线计算样品浓度。

检测范围 通常为 0.25 ng/mL – 8 ng/mL

灵敏度 最低检测浓度通常小于 0.1 ng/mL 或 1.0 pg/mL

样本类型 血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、组织匀浆、细胞培养上清等

保质期 通常为6个月

保存条件 2-8℃ 避光保存（运输通常需低温冰袋或干冰）

样本处理要求

样本的质量直接影响实验结果，以下是关键处理步骤：

血清：全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后离心（约1000-3000 rpm）取上清。若需长期保存，置于-20℃或-80℃，但应避免反复冻融。

血浆：使用EDTA或肝素作为抗凝剂采集血液，采集后30分钟内离心取上清。

组织匀浆：用预冷的PBS冲洗组织去除残留血液，按重量体积比（如1:9）加入PBS进行冰上研磨，随后离心取上清。

注意事项：溶血或脂血样本可能会影响检测结果，应尽量避免使用严重溶血的标本。

实验操作关键点与注意事项

为了确保数据的准确性和重复性，请注意以下几点：

平衡温度：试剂盒从冰箱取出后，必须在室温（20-25℃）平衡20分钟后再使用，特别是洗涤液，结晶需完全溶解。

洗板：洗板不彻底是导致误差的主要原因之一。在加入底物前，必须确保孔内液体被吸干，且洗涤过程要彻底（通常洗板5次）。

加样：加样时要精准，避免气泡。如果样本量大，建议分批操作。

显色：底物液应呈无色或浅色，变蓝的底物不能使用。显色过程需避光。

终止反应：加入终止液后，应在15分钟内完成读数。

安全：所有样本和试剂均应视为潜在传染源，按规定的程序处理废弃物。

结果计算

你需要以标准品的OD值为横坐标，标准品浓度为纵坐标，绘制标准曲线（通常为四参数逻辑拟合或直线回归方程）。将样本的OD值代入方程，即可计算出样本中雄激素的浓度。如果样本经过稀释，计算结果时需乘以相应的稀释倍数。
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