预期用途

本试剂盒采用竞争性酶联免疫吸附法(Competitive ELISA)，用于定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆液中的天然双氢睾酮(DHT)浓度。仅供科研使用(For Research Use Only, RUO)，不用于临床诊断。

检测原理

微孔板： 预包被有羊抗鼠IgG。

**抗体： 特异性抗大鼠DHT单克隆抗体。

DHT-HRP偶联物： DHT与辣根过氧化物酶(HRP)的偶联物(Competitor)。

样本/DHT标准品： 其中的游离DHT与DHT-HRP偶联物竞争性地结合限量的抗DHT抗体。

孵育与洗板： 将含有抗DHT抗体、DHT-HRP偶联物以及样本（或标准品）的混合物加入孔中。游离样本DHT和DHT-HRP会竞争结合抗DHT抗体。然后洗去未结合的成分。

信号产生与检测： 加入HRP底物溶液(如TMB)。结合在孔中的DHT-HRP偶联物催化底物反应，产生蓝色产物，加入终止液(如稀硫酸)后变为黄色。颜色深浅与样本中的DHT浓度成反比。 在特定波长(如450nm)下测量吸光度值(OD值)。

定量分析： 以DHT标准品浓度为横坐标(X轴)，其对应的OD值为纵坐标(Y轴)，绘制标准曲线。未知样本中的DHT浓度可通过其OD值代入标准曲线计算得出。

试剂盒组分

预包被板 (Anti-Mouse IgG Coated Microplate): 1块 (96孔, 12条x8孔, 可拆卸)

大鼠DHT标准品 (DHT Standards)： 通常5-7瓶冻干粉或浓度梯度液体 (示例范围: 0, 10, 30, 100, 300, 1000, 3000 pg/mL - 实际范围依试剂盒而定)。需用样本稀释液或标准品稀释液重溶/配制。

DHT-HRP偶联物 (DHT-HRP Conjugate): 1瓶

抗大鼠DHT单克隆抗体 (Anti-Rat DHT Monoclonal Antibody)： 1瓶

样本稀释液 (Sample Diluent)： 1瓶 (用于稀释高浓度样本)

标准品稀释液/标准品复溶液 (Standard Diluent/Reconstitution Buffer)： 1瓶

浓缩洗液 (Wash Buffer Concentrate)： 1瓶 (通常20-25X浓缩，使用时需用去离子水稀释)

底物溶液 (Substrate Solution - TMB): 1瓶 (避光保存)

终止液 (Stop Solution)： 1瓶

封板膜 (Plate Sealer)： 数张

产品说明书 (Product Insert)： 1份

操作步骤

准备：取出试剂盒平衡至室温(约30分钟，避免阳光直射)。配制好洗液(1X)、所有标准品、样本(根据预估浓度可能需要稀释)。

加样：设复孔。空白孔(Blank)：仅加样本稀释液。标准品孔(Standard)：加不同浓度标准品各50μL。样本孔(Sample)：加50μL适当稀释的样本或原液。

加抗体与酶标物：向除空白孔外的所有孔中，依次加入：50μL DHT-HRP偶联物 + 50μL抗大鼠DHT单克隆抗体。

混合：轻拍板壁使混匀，或用封板膜封好板，置于旋转混合器上低速振荡数秒。

孵育：覆盖封板膜，37°C避光温育2小时（具体时间依厂家说明!）。

洗板：小心揭掉封板膜，手动/洗板机洗板5次。每次每孔加满300μL洗液，浸泡30秒后彻底拍干/吸干孔内液体。

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