大鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒

实验原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附技术。预包被抗大鼠PⅢNP抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育洗涤后，加入TMB显色底物，在过氧化物酶催化下显色（蓝色→黄色）。显色深度与样本中PⅢNP浓度呈正相关，通过450 nm波长测定OD值，计算浓度。

试剂盒组成

| 组分 | 48T规格 | 96T规格 | 保存条件 |

| 酶标包被板 | 1×48孔 | 1×96孔 | 2–8℃ |

| 标准品 | 0.3 mL×6管 | 0.3 mL×6管 | 2–8℃ |

| 酶标试剂 | 5 mL×1瓶 | 10 mL×1瓶 | 2–8℃ |

| 显色剂A/B液 | 各3 mL×1瓶 | 各6 mL×1瓶 | 避光2–8℃ |

| 终止液 | 3 mL×1瓶 | 6 mL×1瓶 | 2–8℃ |

| 20×浓缩洗涤液 | 15 mL×1瓶 | 25 mL×1瓶 | 2–8℃（稀释后使用） |

| 封板膜、密封袋 | 各2片/1个 | 各2片/1个 | 室温 |

样本处理要求

血清/血浆：

采集后室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟（血浆需抗凝处理）。

分装上清于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

组织匀浆：

按重量比加入PBS匀浆，离心取上清检测。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释。

加样：每孔加入样本或标准品50 μL，随后加入酶标试剂50 μL（空白孔除外）。

温育：37℃孵育60分钟，洗板5次。

显色：每孔加显色剂A/B液各50 μL，37℃避光反应15分钟。

终止与检测：加终止液50 μL，15分钟内测定450 nm OD值。

注意事项

储存：未开封试剂盒-20℃保存（部分组分需4℃）；开封后酶标板需密封防潮。

稳定性：有效期内活性降低率＜5%，建议重复实验环境条件一致。

仪器：需配备450 nm滤光片酶标仪及微量加样器。

计算与结果分析

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。若样本OD值超出范围，需适当稀释后重测。
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