大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被大鼠PⅢNT抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育和洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，酸化后呈黄色，其颜色深度与样本中PⅢNT浓度呈正相关。通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），计算样本浓度。

样本要求与处理

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，取上清；避免反复冻融。

血浆：EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃离心（1000×g，15分钟），分离上清。

组织匀浆：

用预冷PBS（0.01 M, pH 7.4）冲洗组织，去除血液后剪碎。

按重量体积比1:9加入PBS（含蛋白酶抑制剂），冰上研磨，超声或冻融裂解细胞。

5000×g离心5-10分钟，取上清检测。

其他样本（如细胞培养上清）：1000×g离心20分钟，取上清。

注意：溶血、脂血或细菌污染样本可能影响结果，需避免。

试剂盒组成

96孔配置：微孔板（8×12条）、标准品（0.3 mL×6管）、样本稀释液（6 mL）。

48孔配置：微孔板（8×6条）、标准品（0.3 mL×6管）、样本稀释液（3 mL）。

储存条件：-20℃长期保存；频繁使用时2-8℃可稳定6个月。

所需自备器材

酶标仪（450 nm滤光片）。

精密移液器及枪头（0.5-1000 μL范围）。

37℃恒温箱。

蒸馏水或去离子水。

注意事项

实验需严格按说明书操作，结果以酶标仪读数为准。

开封后未使用的微孔板需密封干燥保存。

建议所有样本及标准品做双复孔检测，减少误差。

显色过浅可延长底物温育时间；浑浊样本需离心或过滤后检测。

适用范围

适用于大鼠血清、血浆、组织匀浆等样本中PⅢNT的定量检测，主要用于科研用途。
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