大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：

预包被抗大鼠COL III抗体于微孔板；

加入样本或标准品，COL III与固相抗体结合；

加入生物素标记检测抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物；

加入辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素；

加入TMB底物显色，终止后测定450 nm吸光度（OD值）；

根据标准曲线计算样本中COL III浓度。

检测范围

15.63~1000 pg/mL（典型范围，可能略有差异）

灵敏度：通常 ≤ 5 pg/mL

样本类型及处理

血清：室温静置30分钟，2000×g离心15分钟取上清。

血浆：EDTA/肝素抗凝，离心同上。

组织匀浆：按重量加入PBS（如1:9），匀浆后10,000×g离心10分钟取上清。

细胞上清液：直接离心取上清。

避免反复冻融，-80℃分装保存。

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被微孔板 | 96孔 | 1块 |

| COL III标准品 | 冻干粉/液体 | 1支 |

| 样本稀释液 | 20 mL | 1瓶 |

| 生物素标记检测抗体 | 120 μL | 1支 |

| HRP标记链霉亲和素 | 120 μL | 1支 |

| TMB显色液 | 10 mL | 1瓶 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL | 1瓶 |

| 洗涤液（20×浓缩） | 30 mL | 1瓶 |

| 封板膜 | - | 4张 |

操作步骤

标准品稀释：用稀释液梯度稀释至0~1000 pg/mL。

加样：标准品/样本各100 μL加入微孔，37℃孵育90分钟。

洗板：洗涤液洗3次。

加检测抗体：100 μL/孔，37℃孵育60分钟。

洗板：重复步骤3。

加酶结合物：100 μL/孔，37℃孵育30分钟。

洗板：重复步骤3。

显色：加TMB 90 μL/孔，避光反应15~20分钟。

终止：加终止液50 μL/孔。

检测：450 nm波长读取OD值（参考波长630 nm）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值从曲线计算浓度，乘以稀释倍数。

性能参数

精密度：板内变异系数（CV）< 10%，板间CV < 15%。

回收率：血清/血浆样本通常为85%~115%。

特异性：不与大鼠Ⅰ型、Ⅳ型胶原等交叉反应。

应用领域

肝/肺纤维化研究

伤口愈合评估

器官纤维化疾病模型（如肾纤维化、心肌纤维化）

抗纤维化药物筛选
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