大鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA试剂盒

基本参数

样本类型：血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液

检测范围：15.6–1000 pg/mL（典型值）

灵敏度：≤3.9 pg/mL

检测原理：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）

保存条件：2–8℃（未开封），有效期12个月

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 数量

| 预包被抗大鼠Col II微孔板 | 96孔（12条×8孔） | 1块 |

| 大鼠Col II标准品 | 冻干粉/液体 | 2瓶 |

| 标准品稀释液 | 1 mL | 1瓶 |

| 生物素化检测抗体 | 100×浓缩液 | 120 μL |

| HRP标记链霉亲和素 | 100×浓缩液 | 120 μL |

| 显色底物TMB溶液 | 避光瓶 | 11 mL |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 透明溶液 | 10 mL |

| 20×洗涤缓冲液 | 50 mL | 1瓶 |

| 封闭液（5% BSA-PBS） | 10 mL | 1瓶 |

注：

各组分使用前需平衡至室温（25℃）。

标准品需用稀释液复溶（示例浓度梯度：0、15.6、31.25、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）。

样本处理指南

| 样本类型 | 预处理要求（关键步骤） |

| 血清/血浆 | 1. 采集后2000×g离心15分钟；
2. 避免溶血或反复冻融（≤3次）；
3. 稀释比例建议1:5–1:10。 |

| 组织匀浆 | 1. 按重量体积比1:9加PBS（pH7.4）匀浆；
2. 10000×g离心10分钟；
3. 取上清检测，稀释度依浓度调整。 |

| 细胞上清 | 直接检测或适度稀释（避免含酚红培养基干扰）。 |

注意：所有样本在-80℃可保存6个月，检测前需充分混匀。

操作流程

准备试剂：

稀释洗涤液：20×缓冲液 + 去离子水（1:19）。

配制检测抗体工作液：生物素化抗体 + 稀释液（1:100）。

配制HRP工作液：链霉亲和素 + 稀释液（1:100）。

加样与孵育（标准曲线复孔检测）：

| 操作 | 体积 | 时间/温度 |

| 加标准品/样本 | 100 μL | 37℃ 60 min |

| 加生物素化抗体液 | 100 μL | 37℃ 60 min |

| 加HRP工作液 | 100 μL | 37℃ 30 min（避光）|

| 加TMB显色 | 90 μL | 室温15 min（避光）|

| 加终止液 | 50 μL | 立即读数 |

洗涤：每步骤后弃液，每孔注入300 μL洗涤液，重复5次（最后一次拍干）。

检测：

酶标仪波长：450 nm（校正波长630 nm）。

读取时间：终止反应后≤30分钟内。

结果计算

计算标准品/样本的平均OD值。

以标准品浓度为横坐标（log）、OD值为纵坐标，拟合标准曲线（四参数逻辑模型）。

根据样本OD值计算浓度，公式示例：

[ C = \frac{\text{OD} - b}{m} \times D ]

（(C)=浓度；(D)=稀释因子；(b)=截距；(m)=斜率）

注意事项

质量控制：

空白孔OD值应≤0.08。

标准曲线相关系数（R²）≥0.99。

质控样本回收率应在85%-115%范围内。

实验干扰：

避免使用叠氮化钠防腐剂（抑制HRP活性）。

高脂血症样本需超速离心去除脂质。

精密度数据：

| 参数 | 批内变异（CV%） | 批间变异（CV%） |

| 低浓度样本 | ≤8% | ≤12% |

| 高浓度样本 | ≤6% | ≤10% |

技术参数

特异性：与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原交叉反应＜0.1%；无大鼠内源干扰（IL-1β、TNF-α等）。

检测范围上限扩展：样本浓度过高时可用封闭液稀释（最高1:1000）。

适用疾病模型：关节炎软骨损伤、椎间盘退变、纤维化研究等。
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