试剂盒基本原理

采用双抗体一步夹心法ELISA技术：

微孔板预包被人大肠菌素(colicin)特异性捕获抗体，加入样本后，目标抗原与固相抗体结合；

再加入HRP标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物；

TMB底物在HRP催化下显蓝色，酸化后转为黄色，450nm处测OD值，浓度与颜色深浅正相关。

核心性能参数

参数 指标

灵敏度 最低检测限＜10 pg/ml（部分产品达pg级）

特异性 不与其他细菌毒素或结构类似物交叉反应

重复性 板内CV＜10%，板间CV＜15%

检测范围 15.6-1000 pg/ml（梯度稀释标准品）

保存条件 2-8℃避光保存，有效期6个月；-20℃可存12个月

规格 48T/96T（可检测42/84个样本，含标准品和复孔）

样本处理要求

血清/血浆：

血清：3000转离心10分钟取上清；

血浆：EDTA/肝素抗凝，3000转离心30分钟，建议加抑肽酶（1000U/ml）防止降解。

组织匀浆/细胞上清：

组织：按1:9比例加PBS（pH7.4）冰浴匀浆，3000转离心20分钟取上清；

细胞上清：离心10分钟去除沉淀，-80℃分装避免反复冻融。

特殊样本：

尿液：取晨尿中段，2000转离心15分钟；腹水/脑脊液需稀释5-10倍后检测。

操作流程

试剂准备：

试剂盒室温平衡20分钟，30倍浓缩洗涤液用蒸馏水稀释（如10ml浓缩液+290ml水）。

加样与温育：

标准孔加50μL梯度标准品（1000、500、250 pg/ml等），样本孔加10μL样本+40μL稀释液（稀释5倍）；

每孔加50μL酶标试剂（空白孔除外），37℃温育30分钟（严格计时）。

洗板与显色：

手工洗板5次：每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，拍干；

加显色剂A、B各50μL，37℃避光显色15分钟，加终止液50μL（蓝色转黄色）。

读数与计算：

15分钟内用酶标仪450nm读数，以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，样品浓度=（OD值对应浓度）×稀释倍数（×5）。

注意事项

试剂使用：

浓缩洗涤液若有结晶，50℃水浴溶解后冷却至室温再稀释；酶标试剂使用前轻轻颠倒混匀。

操作禁忌：

样本含NaN₃会抑制HRP活性，不可检测；溶血或高血脂样本需预处理（如超速离心）。

未用完板条需密封后2-8℃保存，避免受潮；封板膜一次性使用，防止交叉污染。

结果判断：

标准品OD值应呈梯度下降，R²≥0.9900为有效曲线；样本OD值过高需用稀释液进一步稀释（如1:10或1:20）。

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