检测原理

本试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育和洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，酸性终止液作用下最终呈黄色。颜色深浅与样本中胆固醇（CH）浓度呈正相关，通过酶标仪测定450nm波长下的吸光度（OD值），计算浓度。

试剂盒组成

包被微孔板

胆固醇标准品（冻干粉，需复溶）

HRP标记检测抗体

浓缩洗涤液（20×）

TMB显色底物

终止液

说明书及质检报告

样本要求

适用于血清、血浆、细胞上清液等。样本需离心去除颗粒物，避免反复冻融。

操作步骤

标准品复溶：用去离子水溶解冻干标准品，静置10分钟后混匀。

加样：每孔依次加入标准品或样本50μL，随后加入HRP标记抗体50μL，37℃孵育60分钟。

洗涤：弃液后每孔加满洗涤液（1×稀释），静置30秒后弃去，重复5次。

显色：每孔加入TMB底物100μL，避光孵育15分钟。

终止：加入终止液50μL，15分钟内测定OD值。

注意事项

保存条件：未开封试剂盒需2-8℃保存，复溶后标准品需当日使用。

温度控制：洗涤液若出现结晶，可37℃加热至溶解，冷却至室温后使用。

操作规范：

不同批号组分禁止混用（洗涤液、终止液除外）；

加样需精准，建议使用微量振荡器混匀；

所有耗材一次性使用，避免交叉污染；

实验人员需穿戴防护装备，按生物安全规范操作。

质量控制：建议标准品及样本做双孔检测，确保结果重复性。

技术参数

检测范围：1-32 mg/dL（具体以试剂盒批次为准）

灵敏度：<0.5 mg/dL

精密度：批内CV<10%，批间CV<15%

有效期：6个月（2-8℃密封保存）

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。

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