预期用途

本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附技术（ELISA），用于体外定量检测人血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）或组织匀浆液样本中内皮素前体（Big Endothelin, Big ET-1）的浓度。

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心ELISA法：

预包被抗人Big ET单抗于微孔板上

样本/标准品中的Big ET与孔内抗体结合

加入生物素标记的检测抗体形成复合物

结合链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）

TMB底物显色，颜色深度与Big ET浓度成正比

主要技术参数

| 项目 | 参数 |

| 检测范围 | 0.1 - 1000 pg/mL |

| 最低检测限 (LOD) | 0.05 pg/mL |

| 灵敏度 (LLOQ) | 0.1 pg/mL |

| 精密度 | 板内CV < 8% | 板间CV < 12% |

| 总检测时间 | ~3小时（含温育和显色） |

| 样本类型 | 血清 / EDTA或肝素血浆 / 细胞培养液 / 组织匀浆液 |

| 样本用量 | 20 μL/孔（建议重复检测） |

| 试剂盒储存 | 2-8℃避光（部分组分需冷冻） |

| 有效期 | 12个月（见包装盒标注） |

试剂盒组分（96孔规格）

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被微孔板 | 8孔×12条 | 1板 |

| Big ET标准品 | 冻干粉 | 2管（使用前复溶） |

| 生物素标记抗体 | 液体 | 1管（0.6mL） |

| 链霉亲和素-HRP | 液体 | 1管（0.3mL） |

| TMB显色液 | 液体 | 1瓶（10mL） |

| 终止液 (2M H₂SO₄) | 液体 | 1瓶 (10mL) |

| 洗涤缓冲液 (20×浓缩) | 液体 | 30mL |

| 封板膜 | - | 4张 |

| 说明书 | - | 1份 |

样本处理

血清/血浆：采集后30分钟内离心（2500×g, 10min），分装后**-80℃冻存**（避免反复冻融）

组织匀浆：加PBS（含蛋白酶抑制剂）匀浆后离心取上清

稀释要求：若样本值超出标准曲线范围，用标样稀释液进行稀释

实验流程概要

准备试剂：将标准品梯度稀释（0, 0.1, 1, 10, 100, 500, 1000 pg/mL）

加样：标准品/样本各20μL → 孔板

孵育：37℃ 60分钟 → 洗板3次

加检测抗体：每孔100μL → 37℃ 60分钟 → 洗板3次

加酶结合物：每孔100μL → 37℃ 30分钟（避光）→ 洗板5次

显色：每孔加TMB 90μL → 37℃ 15分钟（蓝色）

终止：每孔加终止液50μL → 黄色（立即测量）

读数：450nm波长测OD值（建议参考双波长630nm校正）

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（建议四参数拟合）

用样本OD值代入曲线方程计算浓度，乘以稀释倍数

质量控制

空白孔OD值应 < 0.1

标准曲线R² ≥ 0.990

每板应包含质控样品（建议设置高/中/低浓度）

注意事项

实验前：所有试剂需平衡至室温（20-25℃），避免洗涤液结晶

操作中：

使用加样枪避免气泡

每步孵育需覆膜避光

洗涤需彻底（建议使用自动洗板机）

TMB显色时间依据室温适当调整

保存：未用板条放回干燥袋中密封保存于2-8℃

限研究使用：不可用于临床诊断

公司正在出售的产品