检测原理

本试剂盒采用竞争法ELISA原理。预包被抗体的微孔板中，加入样本（或标准品）和生物素标记的雌二醇（Biotin-E2），游离的E2与Biotin-E2竞争结合抗体位点。洗涤后加入链霉亲和素-HRP（Streptavidin-HRP），形成抗体-Biotin-E2-SA-HRP复合物。加入TMB显色底物，显色强度与样本中E2浓度成反比。

检测方法：竞争性酶联免疫吸附试验（Competitive ELISA）

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96T） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 1块（12条×8孔） | 2-8℃ |

| E2标准品（0 pg/mL） | 1瓶（冻干粉/液体） | -20℃ |

| E2标准品系列（20-2000 pg/mL）| 5瓶（冻干粉/液体） | -20℃ |

| 样本稀释液 | 1瓶（20mL） | 2-8℃ |

| 生物素标记E2（Biotin-E2）| 1瓶（150μL） | -20℃ |

| 链霉亲和素-HRP（SA-HRP） | 1瓶（150μL） | -20℃ |

| TMB显色底物 | 1瓶（10mL） | 2-8℃避光 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10mL） | 室温 |

| 洗涤液（20×浓缩液） | 1瓶（30mL） | 2-8℃ |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本要求

血清：红头管采集，室温凝固30分钟，离心10分钟（2000×g），分离血清。2-8℃保存≤24小时，-20℃长期保存，避免反复冻融。

血浆：EDTA/肝素抗凝，离心分离血浆（注意肝素可能干扰结果）。

细胞上清/组织匀浆：离心去除沉淀，稀释后检测。

稀释建议：一般样本1：10稀释（以实际验证为准）。

操作步骤

准备试剂：恢复室温，配制洗涤液（1×）。

加样：

孔1-2：空白对照（稀释液）

孔3-8：E2标准品（0、20、100、400、1000、2000 pg/mL）

其余孔：待测样本（稀释后）

每孔50μL + 50μL Biotin-E2 → 轻轻混匀，37℃孵育90分钟。

洗涤：甩去液体，每孔加300μL洗涤液，静置30秒后甩干，重复5次。

加酶：每孔加100μL SA-HRP → 37℃孵育60分钟 → 洗涤5次。

显色：每孔加90μL TMB → 37℃避光显色10-20分钟（蓝色）。

终止：每孔加50μL终止液 → 颜色变黄。

读数：30分钟内于450nm波长测定OD值（参考波长630nm）。

结果计算

计算标准曲线：以标准品浓度为横坐标（log值），OD值为纵坐标，拟合4参数曲线（或logit-log曲线）。

根据样本OD值从曲线计算浓度，乘以稀释倍数。

技术参数

灵敏度：≤10 pg/mL（最低检测限）

检测范围：10-2000 pg/mL（覆盖生理及病理范围）

精密度：

批内变异系数（CV）< 8%

批间CV < 12%

特异性：

不与雌酮（E1）、雌三醇（E3）、睾酮等交叉反应（交叉率<0.1%）。

回收率：85%-115%（血清样本验证）

注意事项

试剂使用前摇匀，避免泡沫。

不同批次试剂不可混用。

显色时间需优化，避免过深影响线性。

高值样本需进一步稀释。

遵守生物安全规范，终止液具有腐蚀性。

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