产品概述

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清等样本中的人促甲状腺素释放激素（TRH）含量。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），具有高灵敏度和特异性，适用于科研用途，严禁用于临床诊断。

实验原理

包被抗体：微孔板预包被高纯度TRH特异性抗体，形成固相捕获抗体。

抗原结合：加入样本或标准品后，TRH与固相抗体结合。

酶标抗体反应：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：洗涤后加入TMB底物，在HRP催化下生成蓝色产物，酸性终止液转化为黄色，颜色深浅与TRH浓度正相关。

检测：450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组成

96孔配置：

预包被微孔板（96T）

TRH标准品（400 ng/mL，0.6 mL）

空白对照（1.0 mL）

标准品稀释缓冲液（5 mL）

HRP标记检测抗体（6 mL）

洗涤缓冲液（20 mL，需按说明书稀释）

TMB显色液（10 mL）

终止液（10 mL）

封板膜（1张）

48孔配置：各组分体积减半。

样本处理要求

血清/血浆：全血室温静置2小时或4℃过夜后离心（1000×g，20分钟），取上清检测，-20℃以下保存需避免反复冻融。

组织/细胞上清：匀浆后离心取上清，建议分装保存。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释至目标浓度。

加样：每孔依次加入标准品或样本（50 μL）、检测抗体（50 μL），37℃孵育60分钟。

洗涤：弃液后加洗涤液洗板5次。

显色：每孔加TMB底物（100 μL），避光反应15分钟。

终止：加入终止液（50 μL），立即测定OD值。

注意事项

储存条件：未开封试剂盒2-8℃保存，有效期6个月；开封后组分需按标签要求存放。

避免污染：不同批次试剂勿混用，移液枪头需一次性使用。

质量控制：建议每批次实验同步检测标准曲线及质控样本。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线（推荐四参数拟合），样本浓度通过曲线方程自动计算。

技术参数

检测范围：1.56–100 ng/mL（具体以实际标准曲线为准）。

灵敏度：≤0.5 ng/mL。

批内/批间变异系数：均<10%。

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