检测原理

采用竞争法ELISA原理：

预包被板：微孔板预先包被羊抗鼠IgG抗体。

抗体-抗原反应：样本中的E3与加入的生物素标记E3（E3-Biotin） 竞争结合有限量的抗E3单克隆抗体。

信号放大：加入链霉亲和素-HRP（Streptavidin-HRP），与E3-Biotin结合形成复合物。

显色测定：加入TMB底物显色，终止反应后于450nm波长下测定OD值。

样本中E3浓度↑ → OD值↓

适用样本类型: 血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、尿液、细胞培养上清液

检测方法: 竞争性ELISA法

保存条件: 2-8℃避光保存（未开封效期12个月）

试剂盒组成

（96孔板规格）

| 组分 | 规格/数量 | 状态 |

| 预包被微孔板 | 12条×8孔 | 即用型 |

| E3标准品 | 6管（0, 1.56, 3.12, 6.25, 12.5, 25 ng/mL） | 冻干粉 |

| 生物素标记E3（E3-Biotin） | 1管（120×） | 浓缩液 |

| 抗E3单克隆抗体 | 1管（120×） | 浓缩液 |

| 链霉亲和素-HRP（SA-HRP） | 1管（120×） | 浓缩液 |

| 样本/标准品稀释液 | 30 mL | 即用型 |

| TMB显色底物 | 11 mL | 即用型 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 11 mL | 即用型 |

| 洗涤缓冲液（25×） | 50 mL | 需稀释 |

样本前处理

| 样本类型 | 处理要求 |

| 血清/血浆 | 4℃离心3000×g 10分钟，避免溶血、脂血；建议样本-20℃保存（≤3个月），避免反复冻融 |

| 尿液 | 离心去除沉淀物，必要时用稀释液1:5稀释 |

| 细胞上清 | 直接检测或适当稀释 |

标准曲线范围

0.78 - 100 ng/mL（典型曲线范围，实际以标准品梯度为准）

灵敏度（最低检测限）：0.39 ng/mL

操作步骤

试剂配制：洗涤缓冲液按1:25用蒸馏水稀释。

加样（50μL/孔）：

标准品孔：不同浓度E3标准品（0-25 ng/mL）

样本孔：待测样本（建议做复孔）

加入抗体&探针：每孔加50μL E3-Biotin + 50μL抗E3单抗，37℃避光孵育60分钟。

洗涤：洗板5次。

加酶：每孔加100μL SA-HRP，37℃孵育30分钟。

显色：洗板后加100μL TMB，避光显色10-20分钟（蓝色）。

终止&读数：加50μL终止液（转黄色），5分钟内于450nm测OD值。

数据计算

计算复孔平均OD值。

以标准品浓度为X轴（Log值），%B/B₀ = [（样本OD - 空白OD）/（0标准OD - 空白OD）]×100% 为Y轴，拟合四参数逻辑曲线（4PL）。

根据样本% B/B₀值，从曲线方程计算E3浓度。

技术性能

| 参数 | 结果 |

| 回收率 | 85-115% (血清/尿液) |

| 板内精密度 | CV < 8% |

| 板间精密度 | CV < 12% |

| 特异性 | 与雌酮（E1）交叉反应 < 0.1%，雌二醇（E2）< 0.01% |

临床应用参考范围

| 人群 | E3浓度范围 (ng/mL) | 备注 |

| 成年女性 | 0.1-6.0（非孕期） | 黄体期最高 |

| 孕妇 | 随孕周升高 | 孕晚期可达 50-200 ng/mL |

| 男性 | < 2.0 | - |

注意事项

所有试剂使用前平衡至室温（20-25℃）。

终止液具强腐蚀性，避免接触皮肤。

尿液样本需校正肌酐浓度以排除稀释影响。

孕妇血清样本如浓度过高，建议使用稀释液预稀释。

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