人Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将特异性抗体预包被于酶标板，加入待测样本或标准品后，样本中的Col Ⅱ抗原与包被抗体结合，洗板去除未结合成分。依次加入生物素化检测抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，形成抗体-抗原-抗体-酶复合物。洗板后加入显色底物（TMB），在HRP催化下显蓝色，终止反应后转为黄色。通过酶标仪测定450 nm波长处的吸光度（OD值），Col Ⅱ浓度与OD值呈正相关，标准曲线计算样本浓度。

样本要求

血清：无菌采血，避免溶血，3000 rpm离心10分钟分离血清。

血浆：建议使用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝，3000 rpm离心30分钟取上清。

细胞上清液：离心去除颗粒物（3000 rpm，10分钟）。

组织匀浆：生理盐水匀浆后离心取上清（3000 rpm，10分钟）。

保存：分装后-20℃冻存，避免反复冻融；检测前室温解冻并混匀。

试剂盒组成

预包被酶标板

Col Ⅱ标准品

生物素化抗体

HRP标记亲和素

TMB显色液

终止液

洗涤缓冲液（浓缩液）

操作步骤

标准品与样本加样：每孔加入标准品或样本100 μL，37℃孵育1小时。

洗板：洗涤缓冲液洗板3次。

加检测抗体：每孔加入生物素化抗体，37℃孵育30分钟，洗板。

加酶结合物：加入HRP标记亲和素，37℃孵育30分钟，洗板。

显色：加入TMB底物，避光反应15分钟。

终止与检测：加入终止液，30分钟内测定450 nm OD值。

注意事项

试剂盒保存于2~8℃，有效期内使用；复溶后标准品分装冻存。

避免底物接触金属离子或氧化剂；终止液含酸性物质，需防护操作。

样本避免反复冻融或长时间室温放置。

技术参数

检测范围：0.156~10 ng/mL（具体以标准曲线为准）。

灵敏度：<0.1 ng/mL。

特异性：不与Ⅰ型、Ⅲ型胶原交叉反应。

批内/批间变异系数：≤10%。
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