人Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。微孔板预包被特异性抗体，样品或标准品中的Col Ⅲ与包被抗体结合后，依次加入生物素化检测抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，形成复合物。洗涤后加入显色底物（TMB），在HRP催化下显蓝色，终止反应后转为黄色。通过酶标仪测定450 nm处吸光度（OD值），Col Ⅲ浓度与OD值呈正相关，标准曲线计算样品浓度。

样本要求

血清：无菌无热原采血管收集，避免溶血，3000 rpm离心10分钟分离血清。

血浆：EDTA、柠檬酸钠或肝素抗凝，3000 rpm离心30分钟取上清。

细胞上清液：离心去除颗粒物（3000 rpm，10分钟）。

组织匀浆：生理盐水匀浆后离心（3000 rpm，10分钟）取上清。

保存：分装后-20℃冻存，避免反复冻融；检测前室温解冻并混匀。

试剂盒组成

预包被微孔板

Col Ⅲ标准品

生物素化抗体

HRP标记亲和素

TMB显色液

终止液

洗涤缓冲液（浓缩液需稀释）

操作步骤

标准品与样品加样：每孔加入标准品或待测样本，孵育后洗涤。

生物素化抗体孵育：加入生物素化抗体，孵育后洗涤。

酶结合物反应：加入HRP标记亲和素，孵育后洗涤。

显色与终止：加入TMB显色，避光反应后加终止液。

检测：450 nm波长测定OD值，计算浓度。

注意事项

试剂盒保存于2-8℃，有效期6个月；开封后尽快使用。

避免底物接触金属或氧化剂，终止液含酸性物质，需防护操作。

样本避免反复冻融，离心后确保无颗粒物。

技术参数

检测范围：根据标准曲线覆盖线性区间（具体范围参考试剂盒批次说明）。

灵敏度：通常≤1.0 ng/mL。

特异性：与人Col Ⅲ特异性结合，无交叉反应。
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