人apelin 12(AP12)ELISA Ki

产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Apelin 13 (AP13) 含量。试剂盒包含预先包被特异性抗体的微孔板、标准品、检测抗体、HRP酶偶联物及显色底物，适用于心血管疾病、代谢综合征、癌症等领域的研究。

检测原理

包被抗体: 微孔板预包被人Apelin-13单克隆抗体。

样本结合: 样本中的AP13与包被抗体结合。

检测抗体: 加入生物素标记的抗人Apelin-13二抗。

信号放大: 添加链霉亲和素-HRP偶联物。

显色反应: TMB底物经HRP催化显蓝色，终止液（酸性）终止反应变黄色。

定量检测: 450nm波长下测定OD值，标准曲线计算AP13浓度。

试剂盒组分

| 组分名称 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔（12条×8孔） | 2-8°C |

| 人Apelin-13标准品 | 冻干粉：2000 pg/mL（复溶后） | -20°C |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120μL） | -20°C |

| HRP-链霉亲和素偶联物 | 1瓶（120μL） | -20°C |

| TMB显色底物 | 1瓶（11mL） | 2-8°C（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（7mL） | 2-8°C |

| 洗涤缓冲液（20×） | 1瓶（30mL） | 2-8°C |

| 样本稀释液 | 1瓶（20mL） | 2-8°C |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本要求

血清/血浆: EDTA或肝素抗凝血浆（避免溶血），离心后取上清。

细胞培养上清: 离心去除颗粒物。

保存: 短期（≤24h）存放于2-8°C，长期保存需分装存于**-80°C**（避免反复冻融）。

稀释建议: 血清/血浆建议1:2稀释（用样本稀释液），实际稀释倍数需预实验优化。

操作步骤

前处理

稀释标准品：用1mL样本稀释液复溶标准品，梯度稀释至浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/mL。

样本稀释：推荐用样本稀释液1:2稀释样本。

检测流程

加样: 每孔加100μL标准品或样本，37°C孵育90分钟。

洗涤: 弃液，用1×洗涤缓冲液洗板4次。

加检测抗体: 每孔加100μL生物素标记抗体（1:100稀释），37°C孵育60分钟。

重复步骤2洗涤。

加酶偶联物: 每孔加100μL HRP-链霉亲和素（1:100稀释），37°C避光孵育30分钟。

重复步骤2洗涤。

显色: 每孔加90μL TMB底物，避光室温（25°C）孵育15-20分钟。

终止反应: 每孔加50μL终止液，轻摇至蓝色变黄色。

读数: 10分钟内于450nm波长读取OD值（参考波长570/630nm）。

结果计算

以标准品浓度（pg/mL）为X轴，对应OD值（减空白后）为Y轴，拟合4-参数曲线。

样本浓度根据曲线方程自动计算（乘以稀释倍数）。

灵敏度：最低检测限（LOD）≤15 pg/mL

检测范围：62.5 - 2000 pg/mL

回收率：85%-115%（血清样本验证）

精密度：板内CV ≤10%，板间CV ≤15%

注意事项

仅供科研使用，不用于临床诊断。

避免反复冻融标准品及试剂。

不同批次试剂盒不可混用。

接触终止液需戴手套防护。

复溶后未用试剂按说明分装冷冻保存。
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