人apelin 13(AP13)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Apelin-36（AP36） 蛋白浓度。适用于心血管疾病、代谢疾病、肿瘤等领域的科学研究。

检测原理

采用双抗体夹心ELISA法：

预包被：微孔板中预包被抗人Apelin-36单克隆抗体。

样本结合：样本中的AP36与预包被抗体结合。

检测抗体结合：加入生物素标记的抗人Apelin-36检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

信号放大：加入链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）结合物。

显色与定量：加入TMB底物显色，颜色深浅与AP36浓度成正比。终止反应后在450 nm波长下测定吸光度（OD值）。

主要试剂盒组成

| 组分 | 规格/数量 | 保存条件 |

| 预包被抗人AP36微孔板 | 96孔（12条×8孔） | 2–8℃（干燥） |

| 人AP36标准品（冻干粉） | 2瓶（重建后0-1000 pg/mL） | -20℃（长期） |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120 μL） | 2–8℃ |

| 链霉亲和素-HRP结合物 | 1瓶（120 μL） | 2–8℃ |

| TMB显色底物 | 1瓶（10 mL） | 2–8℃（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10 mL） | 室温 |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩） | 1瓶（30 mL） | 室温 |

| 样本稀释液 | 1瓶（15 mL） | 2–8℃ |

样本要求

血清/血浆：采集后分离，-20℃或-80℃分装冻存（避免反复冻融）。

细胞培养上清液：离心去除颗粒，直接检测或冻存。

避免使用：溶血、高脂血或反复冻融样本。

灵敏度与检测范围

最低检测限（LOD）：≤ 1.0 pg/mL

检测范围：3.9–1000 pg/mL

精密度：板内变异系数（CV）< 8%，板间CV < 12%

操作步骤

标准品重建与稀释（梯度浓度：1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.2, 15.6, 0 pg/mL）

加样：每孔加入标准品/样本（100 μL），37℃孵育90分钟。

洗涤：洗板3次。

加检测抗体：每孔加生物素抗体（100 μL），37℃孵育60分钟。

加酶结合物：每孔加链霉亲和素-HRP（100 μL），37℃孵育30分钟。

显色：每孔加TMB（90 μL），避光反应15–25分钟。

终止：每孔加终止液（50 μL），5分钟内读板（450 nm）。

数据处理

以标准品浓度为横坐标（log尺度），OD值为纵坐标绘制标准曲线（四参数拟合）。

根据样本OD值计算AP36浓度（单位：pg/mL）。

注意事项

试剂保存：避免反复冻融标准品或检测抗体，TMB避光保存。

操作规范：加样需精确，洗涤彻底避免交叉污染。

安全防护：终止液为强酸，需佩戴手套操作。

适用性：仅供科研使用，不用于临床诊断。
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