人5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA试剂盒

产品概述

5-脂加氧酶（5-LOX）是催化花生四烯酸转化为白三烯的关键酶，在炎症反应、哮喘及某些癌症的发生发展中起重要作用。该试剂盒主要用于科研领域，定量检测人血清、血浆、细胞培养上清或组织匀浆中的5-LOX含量。

检测方法 双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)

检测范围 通常为 0.156 ng/mL ～ 10 ng/mL

灵敏度 最低检测限约 0.08 ng/mL

样本类型 血清、血浆 (EDTA/肝素抗凝)、细胞上清、组织匀浆、脑脊液等

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法：

包被：用纯化的人5-LOX抗体包被微孔板。

孵育：加入待测样本或标准品，样本中的5-LOX与固相抗体结合。

检测：加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的检测抗体，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色：加入TMB底物液，HRP催化TMB显蓝色，在酸性条件下终止反应后变为黄色。

计算：颜色深浅与样本中5-LOX浓度呈正相关。使用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算浓度。

样本处理与要求

血清：使用不含热原和内毒素的试管，室温静置2小时或4℃过夜，离心（3000转/分，10分钟）取上清。

血浆：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，采集后30分钟内离心（3000转/分，10-30分钟）取上清。

组织匀浆：用预冷的生理盐水或PBS冲洗组织去除血液，按重量体积比（如1:9）加入PBS进行冰浴匀浆，离心取上清。

保存：样本收集后若不立即检测，应分装保存于 -20℃ 或 -80℃，避免反复冻融。

注意事项

防腐剂禁忌：不能检测含有叠氮化钠（NaN3）的样品，因为NaN3会抑制HRP的活性，干扰显色。

试剂平衡：试剂盒从冰箱取出后，需在室温（20-25℃）平衡 15-30分钟 后再使用。

洗涤：洗板是关键步骤，必须彻底。洗板不彻底会导致背景过高或读数不准确。

显色：底物TMB应避光保存，且应在无色或浅色状态下使用。加入终止液后需在15分钟内完成读数。

交叉污染：加样时应使用新的枪头，避免交叉污染。

科研应用背景

5-LOX是花生四烯酸代谢的重要限速酶，检测其表达水平有助于研究：

炎症性疾病：如哮喘、关节炎、炎症性肠病等。

心血管疾病：动脉粥样硬化的发生发展。

肿瘤研究：某些肿瘤细胞中5-LOX的异常表达及其作为治疗靶点的研究。
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