人5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒

产品概述

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），用于定量检测人血清、血浆、细胞上清液、尿液等样本中的5核苷酸酶(5-NT)浓度。检测原理基于特异性抗体与目标蛋白结合，通过酶催化显色反应，最终通过吸光度（OD值）计算样本浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板：包被人5-NT捕获抗体的96孔或48孔板（根据规格选择）。

标准品：浓度梯度溶液，用于建立标准曲线。

检测抗体：HRP标记的人5-NT检测抗体。

底物溶液（A/B）：TMB显色底物。

洗涤液：20×浓缩液，需稀释后使用。

终止液：酸性溶液，用于终止反应。

封板膜：用于温育时密封微孔板。

样本处理

血清样本：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，取上清；避免反复冻融。

血浆样本：使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃离心（1000×g，15分钟），取上清。

其他样本：细胞上清液、尿液等需离心去除颗粒物，澄清后检测。

操作步骤

平衡与准备：取出板条室温平衡20分钟，剩余板条密封保存于4℃。

加样：

标准品孔：加入不同浓度标准品50μL。

样本孔：先加待测样本10μL，再加稀释液40μL。

空白孔：不加样。

孵育：每孔加入HRP标记检测抗体100μL，37℃温育60分钟。

洗涤：弃液体后洗板5次（手工或洗板机）。

显色：每孔加底物A/B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

终止与检测：加入终止液，立即用酶标仪测定450nm波长下的OD值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。

注意事项

保存条件：未开封试剂盒2-8℃保存，开封后尽快使用。

检测范围：1.5-48 pmol/mL。

重复性：板内、板间变异系数应＜10%。

干扰因素：避免溶血、脂血或反复冻融样本。
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