大鼠克拉拉细胞蛋白(CC16) ELISA试剂盒

实验原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被抗大鼠CC16抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育和洗涤后，通过TMB底物显色。显色强度与样本中CC16浓度呈正相关，于450nm波长测定吸光度（OD值）并计算浓度。

样本处理要求

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，取上清检测或-20℃/-80℃保存（避免反复冻融）。

血浆：使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃、1000×g离心15分钟，取上清检测或低温保存。

其他样本（组织匀浆、细胞上清等）：需离心去除颗粒物，澄清液体直接检测或分装冻存。

试剂盒组成

预包被微孔板

CC16标准品（1-2管）

标准品稀释液（10mL）

样品稀释液（10mL）

HRP标记检测抗体（120μL）及稀释液（10mL）

TMB显色液（A/B组各5mL，避光保存）

终止液（10mL）

25×浓缩洗涤液（30mL）

封板膜

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释。

加样：每孔加入样本或标准品50μL，随后加入50μL检测抗体（无需混合）。

温育：37℃孵育60分钟，洗板5次。

显色：每孔加入TMB 100μL，避光反应15分钟。

终止：加入终止液50μL，15分钟内测定OD450nm。

技术参数

检测范围：78.1-5000 pg/mL

灵敏度：≤33 pg/mL

有效期：6个月（2-8℃储存）

批内/批间差：CV＜10%/15%

注意事项

试剂使用前平衡至室温，避免反复冻融。

洗涤时需充分拍干，避免交叉污染。

显色时间需严格控制，强阳性样本建议稀释后复测。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合计算样本浓度。
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