大鼠可溶性CD14(sCD14)ELISA试剂盒

检测原理

双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）。

预包被： 抗大鼠sCD14单克隆抗体预包被于酶标板上。

加样： 加入待测样本或标准品，sCD14与包被抗体结合。

加检测抗体： 加入生物素标记的抗大鼠sCD14检测抗体，形成“抗体-抗原-检测抗体”复合物。

加酶结合物： 加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin）。

显色： 加入TMB底物，HRP催化生成蓝色产物。

终止与检测： 加入终止液（硫酸）后变黄色，在450nm波长下测定吸光度（OD值），OD值与sCD14浓度正相关。

试剂盒组成

| 组分 | 规格/数量 | 保存条件 |

| 预包被酶标板 | 96孔（可拆卸） | 2-8°C |

| 大鼠sCD14标准品 | 冻干粉或液体（含浓度梯度） | -20°C（冻干粉）或2-8°C（液体） |

| 样本稀释液 | 1瓶（20-30mL） | 2-8°C |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（120μL） | -20°C |

| HRP标记链霉亲和素 | 1瓶（120μL） | -20°C |

| TMB显色底物 | 1瓶（10-15mL） | 2-8°C（避光） |

| 终止液（1M H₂SO₄） | 1瓶（10-15mL） | 室温 |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩） | 1瓶（50mL） | 室温 |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本要求

适用样本： 大鼠血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆液。

样本处理：

血清/血浆：离心去除颗粒物，分装后-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。

细胞上清：离心去除细胞碎片，直接检测或-80°C保存。

组织匀浆：用PBS匀浆后离心取上清，稀释后检测。

灵敏度 & 检测范围

灵敏度： 通常 ≤ 1.0 pg/mL

检测范围： 15.6 - 1000 pg/mL

精密度：

板内变异系数（CV）< 10%

板间变异系数（CV）< 15%

操作步骤

试剂准备： 复融标准品、配制洗涤液。

加样： 标准品/样本各100μL加入对应孔，37°C孵育90分钟。

洗涤： 弃液，洗板3-5次（每孔300μL洗涤液）。

加检测抗体： 每孔加100μL生物素标记抗体，37°C孵育60分钟。

洗板（同上）。

加酶结合物： 每孔加100μL HRP-链霉亲和素，37°C孵育30分钟。

洗板（同上）。

显色： 每孔加90μL TMB，避光孵育15-30分钟（显蓝色）。

终止： 每孔加50μL终止液（变黄色）。

检测： 5分钟内用酶标仪读取450nm OD值（校正波长630nm）。

数据处理

以标准品浓度为横坐标（Log值），OD值为纵坐标，拟合4参数或Logistic曲线。

根据样本OD值计算sCD14浓度（注意：稀释样本需乘以稀释倍数）。

注意事项

试剂盒需在有效期内使用，不同批次组分不可混用。

避免反复冻融标准品/样本。

洗板时需彻底，避免交叉污染。

TMB避光保存，显色时间控制一致。

高浓度样本需用稀释液稀释后重测。
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